edta是什么采血管医学拾萃 ｜ 2021年2月刊：采血管的适用检测项目与不适用症——EDTA抗凝管

由于EDTA.Na2溶解度较低，且EDTA.K2与EDTA.K3相比，具有对血液标本中的细胞形态和计数影响非常小等优点，所以国际血液学标准化委员会(ICSH)[5]1993年建议将EDTA.K2作为血常规检验的抗凝剂，由于EDTA能阻止血小板聚集，故也可适用于血小板计数，并且适用于在显微镜下观察血小板形态。基于预期通途，EDTA抗凝管又被称为血常规管。

EDTA抗凝血尤其是高浓度EDTA会造成高渗状态，会引起红细胞皱缩和白细胞聚集，影响红细胞体积，导致形态学改变，因此国际血液学标准化委员会(ICSH)及我国临床检验操作规程[6]均建议全血细胞分析用EDTA.K2 • 2H2O的浓度宜为1.5 ~ 2.2 mg/mL血液，此浓度能较好的发挥EDTA.K2抗凝血效果。

EDTA抗凝管以添加剂形态区分，可分为喷雾态（液态）和干粉态；以血液标本类型区分，又可分为用于静脉血采集的真空采血管和主要用于指尖、足跟血采集的末梢采血管。

2.1 血液一般检验

2.1.1 血细胞分析（血常规）

血细胞分析（血常规）是临床应用最为广泛的一大类血液检验项目的统称，随着全自动血液细胞分析仪（血液分析仪）的普及，目前血细胞分析可检测血红蛋白（Hb）和红细胞计数（RBC）、白细胞计数（WBC）及白细胞分类计数、血小板计数（PLT）、网织红细胞计数（RET）相关的30多项指标。临床用于血细胞分析的血液标本大多数都采用了国际血液学标准化委员会(ICSH)[5]推荐的EDTA.K2抗凝血标本。

影响血细胞分析检测结果的标本因素主要有真空采血管抗凝剂种类及性能、标本保存条件等。

用于采集、保存血液标本的EDTA抗凝管，是影响血细胞分析的重要因素之一，根据真空采血管性能验证相关国内外标准[7, 8]，实验室在选择EDTA抗凝管之前，应当对临床检测报告上的检测项目进行可比性验证，我国卫生健康委员会发布的《WS/T 224-2018真空采血管的性能验证》中推荐的EDTA抗凝管（血常规管）临床检测项目见表2。

Mehmood等人[9]对比了IMPROVACUTER®生产的EDTA.K2和EDTA.K3抗凝管的临床性能，结果表明两种抗凝剂对平均红细胞体积（MCV）、平均血小板体积（MPV）、红细胞分布宽度（RDW）的检测结果有显著差异，提示在选择EDTA抗凝剂种类时应进行充分验证；Ahn等人[10]对比了IMPROVACUTER®和BD Vacutainer®两个厂家生产的EDTA抗凝管，也对比了EDTA.K2和EDTA.K3抗凝管，结果表明，两个厂家的EDTA抗凝血标本检测的红细胞压积（HCT）、平均红细胞体积（MCV）、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)和血沉（ESR）在两管之间有显著性差异，不同种类的EDTA抗凝剂各项检测结果也有显著差异，然而，这些差异并不具有临床意义，因此两个厂家及两种EDTA抗凝剂的采血管均可用与血细胞分析标本采集，该结论与Mehmood等人的并不完全一致，临床在验证EDTA抗凝管时宜结合实际检测需求综合评判。

表2 血常规管的检测项目

样本保存条件是EDTA抗凝血标本分析前稳定的重要因素，Pintér等人研究[11]表明当样品在室温下储存超过8小时，随着标本放置时间的增加，平均红细胞体积（MCV）、平均血小板体积（MPV）显著增加，在室温下72小时内唯一稳定的参数只有血红蛋白（Hb）。国际血液学标准化委员会（ICSH）关于血细胞分析的检测指南[12, 13]中建议血液样本应在采集后的4-8小时内处理，用荧光流式细胞仪计数与红细胞相关的特异性标记血小板，建议EDTA抗凝静脉血标本应在抽血后4小时内进行测量；抗凝血样本应在采集后4小时内制备血涂片，时间过长可引起中性粒细胞和单核细胞的形态学改变[14]。

除了验证血液标本的分析前质量，血液分析仪的性能也是影响检测结果的重要因素。国内外有关血液分析仪的临床医学实验室质量管理相关标准[15, 16]均明确要求，实验室在使用新的血液分析仪测试样本之前，需要对仪器设备及检验程序进行性能验证，评估新仪器的准确度、精密度、检测范围等性能。Ciepiela等人[17]进行的对比性研究表明，迈瑞BC-6800、Sysmex XN-2000和Beckman LH750三种血液分析仪对同样的EDTA钾盐抗凝血标本进行检测，血红蛋白值（Hb）一致性良好，红细胞计数（RBC）总体上不太一致，白细胞分类计数（WBC）结果一致性最差。

综上，在使用EDTA抗凝管进行血细胞分析检测前，应系统评估抗凝剂的选择、真空采血管及仪器的验证、标本采集及保存条件的确定等关键影响因素，降低标本分析前变异发生的风险。

2.1.2 红细胞沉降速率

测定红细胞沉降速率（Erythrocyte Sedimentation Rate，ESR，简称血沉）的金标准是Westergren法（魏氏法）。国际血液学标准化委员会(ICSH)[18]1977年制定的Westergren法血沉测定指南建议使用柠檬酸钠溶液作为全血抗凝剂；美国临床实验室标准委员会（NCCLS）制定的红细胞沉降率（ESR）试验规程[19]则建议使用EDTA抗凝血作为血沉检测的标本；我国临床检验操作规程[6]推荐使用的全血抗凝剂为109 mmol/L 柠檬酸钠溶液或1.5 mg/mL EDTA.K2抗凝剂。柠檬酸钠抗凝的原理与EDTA类似，都是可以与血液中的Ca2+结合形成螯合物，从而阻止血液凝固，柠檬酸钠抗凝全血标本常用于血沉检测。

传统Westergren法为手工法，临床使用生理盐水或柠檬酸钠抗凝剂把EDTA抗凝血标本作1:4稀释后，立即采用魏氏血沉管检测，1小时后读取上层血浆毫米数的方法来检测血沉，操作繁琐，检测时间较长。随着自动化检测仪器的发展，全自动血沉分析仪逐渐普及，有调查[20]显示只有28%的被调查实验室使用未经改良的传统的Westergren方法，而72%的被调查实验室使用改良或替代方法，并可搭配使用标准EDTA抗凝管，消除了对专用ESR管的需要。

综上，临床实验室开展血沉检测可能都会面临抗凝剂的选择、手工法或仪器分析的选择这两个主要问题。Getaneh等人[21]对比了枸橼酸三钠（TSC）和乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝剂对血沉（ESR）结果表明，两种抗凝剂的血沉检测结果有显著差异；Emelike等人[22]采用国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的Westergren方法，用柠檬酸钠稀释液、生理盐水稀释液和EDTA全血悬液（不含任何稀释液）进行血沉测定，用生理盐水稀释和EDTA抗凝全血标本不能很好地代替柠檬酸钠抗凝血标本测定的血沉结果，且研究人员表示如果使用的是固体状态的EDTA抗凝剂，还可避免稀释误差结果表明，这也是结果差异的因素之一。Alfadhli等人[23]比较了全自动血沉分析仪SEDIsystem（TM）与传统手工Westergren法的性能，结果表明两种方法之间有良好的相关性，但自动血沉分析仪的检测结果偏低，需要引入一定的修正系数。

临床一方面希望减少患者的抽血量，减少额外的标本采集成本，另一方面也要对抗凝剂及检测方法进行综合选择，并进行充分验证及质量控制。配合新型自动血沉分析仪或血细胞分析仪，使用血细胞分析的EDTA抗凝血标本，进行血沉检测是目前一种常见的检测策略[24]。Vennapusa等人[25]认为，使用柠檬酸钠稀释EDTA抗凝血标本的方法，引入了2种抗凝剂，偏离了经典的Westergren方法，因此他们研发了一种StaRRsed方法，与经典Westergren方法进行了对比，并根据两种方法的血沉检测结果评估可能的诊断的方法，StaRRsed方法使用EDTA抗凝管采集血样，使用Streck ESR-Auto Plus进行检测，结果表明，两种方法之间存在非线性关系，相关性良好。

综上，目前对于血沉检测的抗凝剂选择及试验方法暂没有统一的准则，实验室可以根据实际情况选择EDTA或柠檬酸钠抗凝剂，并结合仪器进行检测程序的设计，还应建立参考区间并进行验证，另外同样还要注意验证标本的处理前保存条件对检测结果造成的偏差。

2.1.3 血液流变学检验

血液流变学检验（hemorheology）通过检查全血、血浆及血液有形成分(红细胞、白细胞、血小板)的流动性、变形性和聚集性的变化规律，判断血管内血液循环状况，为血流特性监测及治疗效果评估提供客观依据。在主要指标包括全血黏度(blood viscosity)、血浆黏度(plasma viscosity)、红细胞变形性（erythrocyte deformability）。

国际临床血液流变学学会和欧洲临床血液流变学和微循环学会在国际血液学标准化委员会(ICSH) 1986年提出的测量血液粘度和红细胞变形性指南[26]的基础上提出了用于实验和临床研究的血液流变学方法的新指南[27]，建议使用浓度为1.5 ~ 1.8mg/mL EDTA和14 ~ 15 U/mL肝素，并指出肝素对血液流变学参数的影响比EDTA更大，因此推荐首选EDTA作为抗凝剂。我国临床检验操作规程[6]同样指出血流变检测的抗凝剂可采用肝素(10 ~ 20 U/mL)或EDTA.Na2 (1.5 g/L)，为防止对血液的稀释作用，推荐采用固体抗凝剂，若采用液体抗凝剂，应提高抗凝剂的浓度，以减少加入液体的量。

Bartoli等人[28]对比了两种抗凝剂：EDTA.K2和肝素锂对血细胞过滤试验的影响，结果表明，肝素抗凝血标本的全血滤过功能严重受损或受阻，血液粘度和红细胞压积明显高于EDTA抗凝血标本，且血液的流变学特性在储存过程中会发生改变，甚至在1小时后也会发生改变，并且随着时间的推移，这种改变会越来越大。因此一般建议采血后标本宜立即送检进行测试，在室温下存放时间过长，会引起测量结果偏高，若存于4 ℃冰箱可适当延长标本保存时长，实验室需进行验证。血样不宜在0 ℃以下存放，冷冻条件下红细胞会发生破裂，改变血液流变特性。

综上，血液流变学检测的抗凝剂选择暂没有统一的准则，实验室可以根据实际情况选择EDTA或肝素，建立自己实验室的参考区间或对仪器提供的参考区间进行验证。

2.2 血型鉴定与交叉配血

血型鉴定（blood typing）是实施输血治疗前的重要步骤，以确保患者输注相容的血液成分，避免引起输血不良反应。目前输血前相关试验除初步的ABO血型和Rh（D）血型鉴定外，还涵盖了红细胞及血小板的不规则抗体筛查（irregular antibody screening）以及交叉配血（cross matching）等项目。

2.2.1 血型鉴定

传统的血型鉴定方法有玻片法、试管法，目前大多数临床实验室使用的都是微孔板法或微柱凝胶法。美国血库协会（AABB）[29]标准项目委员会制定的关于《血站和输血服务机构标准》[30]推荐ABO血型鉴定前仔细阅读试剂说明书以明确具体的标本要求，一般来说，无抗凝或抗凝标本都可用于ABO定性检测；一些生产商推荐使用全血进行试验；一些生产商推荐将红细胞悬浮于自体血清、血浆或盐水中，或洗涤后悬浮于盐水中，该标本描述与我国临床检验操作规程[6]对血型鉴定推荐标本一致，我国临床检验操作规程还建议，试管法正定型被检样本与反定型中试剂红细胞的细胞悬液浓度皆为2% ~ 5%。

Pu等人[31]研究表明，玻片法、试管法和微柱凝胶法检测血型，EDTA.K2抗凝血和非抗凝血标本的结果一致，无显著性差异，但EDTA.K2抗凝血结果清晰，易于鉴别，非抗凝血的检测结果容易受到天然血凝块的干扰，容易产生假性凝集的结果，因此更推荐使用EDTA.K2抗凝血标本。

2.2.2 抗体筛查

抗体筛查试验一般早于或与交叉配血试验一起完成，在交叉配血前完成抗体检测，可以及时发现并鉴定出具有临床意义的抗体，进而有针对性地选择合适的交叉配血流程及合适的红细胞成分[29]。

美国血库协会（AABB）推荐直接抗人球蛋白试验（Coombs试验）使用EDTA抗凝全血的红细胞标本，间接抗人球蛋白试验使用患者的血清或血浆为标本，并指出，因高效价的抗A、抗B可启动补体包被过程，导致凝集反应产生空间位阻，使用EDTA抗凝血标本可防止这种现象[32]。我国临床检验操作规程[6]推荐的抗人球蛋白试验（Coombs试验）与间接抗人球蛋白试验的标本为：将EDTA抗凝的血样用生理盐水配制成2% – 5%的红细胞悬液。Kitagawa等人[33]研究了53例患者的22种红细胞抗体在血清中的检出率与CPD、ACD和EDTA血浆中的检出率，结果表明所有样本在血清中检测到抗体，均可在血浆中检测出，这些结果表明，EDTA抗凝剂血标本适用于抗原分型，也适用于抗体筛选。

检测红细胞及血小板抗体时，还须考虑标本的新鲜度和类型。保存在抗凝剂中的献血者红细胞，通常在成分血的保存期内会保留抗原性，Swanson等人研究[34]表明EDTA标本保存长达14天后仍保留抗原性，但建议实验室应根据血型鉴定试剂厂家的使用建议制定保存标本的方案。但Hegde等人[35]对比了血液保存在EDTA等4种不同的抗凝剂中在室温条件下储存96小时后血小板相关IgG（PAIgG）的检测值，结果表明48h内血小板抗体测量结果正常，但96小时后，EDTA抗凝血标本中PAIgG升高了22%。因此，建议临床实验室对用于抗体检测的EDTA抗凝血标本保存条件应进行验证。

2.2.3 交叉配血

交叉配血试验又称血液相容性试验，是确保患者安全输血必不可少的试验。凡输注全血、浓缩红细胞、红细胞悬液、洗涤红细胞、冰冻红细胞、浓缩白细胞、手工分离浓缩血小板等患者，均应进行交叉配血试验[36]。除了盐水介质交叉配血试验，美国血库协会（AABB）及我国临床操作规程均指出，交叉配血也可以采用与抗体筛选及抗体鉴定一致的方法。

随着检验技术的革新，全自动血型分析仪实现了血型鉴定、不规则抗体筛查、交叉配血等多项功能的集合，流式细胞术[37]及基因分型技术[38]为疑难配血提供了更高灵敏度的血型鉴定及抗体检测手段。在使用新型检测设备前，实验室仍应对标本采集、标本保存、仪器性能等全检测流程进行验证并将制定相应的质量控制方案，保证检测流程的有效性[39]。

3.1 糖化血红蛋白

糖化血红蛋白（HbA1c）与红细胞寿命和平均血糖水平相关，可反映过去2~3个月的平均血糖水平，不受每天血糖波动的影响，是评价糖尿病患者长期血糖控制较理想的指标。美国糖尿病协会(ADA)[40]及世界卫生组织(WHO)[41]均将HbA1c≥6.5 %作为糖尿病的诊断标准之一。糖化血红蛋白通常采用EDTA抗凝血标本进行检测，我国行业标准及临床操作规程均推荐使用EDTA抗凝血标本，且推荐标本置于4 ℃保存不要超过1周[6, 42]。

EDTA.K2和EDTA.K3都是糖化血红蛋白（HbA1c）测量中最常用的抗凝剂。Vrtaric等人[43]对比了EDTA.K2和EDTA.K3采集的血液标本的HbA1c测量值，结果表明，在Abbott ARCHITECT 分析仪上进行检测得到的结果没有任何临床和统计上的显著差异；但Zungun等[44]对比了EDTA.K2和EDTA.K3采集的血液标本在4小时后HbA1c的检测值，结果表明，4小时后，两种EDTA抗凝血标本在Roche Cobas c501仪器上分析得到的的HbA1c结果存在显著差异。

由于大部分糖尿病诊断检测项目都包含血糖检测，而血糖检测标本主要为氟化钠（NaF）抗凝血标本，所以部分实验室也采用NaF抗凝血作为HbA1c检测的标本，Chusongsang等人[45]对比了EDTA抗凝血和NaF抗凝血在日立717自动分析仪上的HbA1c检测结果，结果表明，两种抗凝血标本的检测结果无显著差异，这说明NaF也可作为HbA1c检测的标本抗凝剂。

综上，采血管抗凝剂、标本保存时长以及检测仪器可能是影响HbA1c检测结果的主要因素也可能对检测结果无显著影响，因此，建议临床实验室应对检测流程中使用的采血管包括末梢采血管、试剂、仪器包括POCT类仪器以及标本保存方式进行验证。

3.2 血氨检测

血氨测定是临床常用的蛋白质代谢产物检查项目之一。肝脏将氨合成尿素，是保证血氨正常的关键，血氨浓度异常升高是肝脏疾病的重要实验诊断及监测指标。我国临床检验操作规程[6]建议检测标本应使用草酸、EDTA或肝素抗凝的血浆标本。。并指出即使在0 ℃，采血后15分钟以上就可引起血氨浓度升高；在25 ℃时，血氨浓度增高速率约为0.017 μg/(min • ml) 血液。因此，采血后必须立即置冰浴，尽快分离出血浆，及时进行测定。

Dairong等人[46]对比了EDTA.K2、EDTA.Na2、肝素三种抗凝血浆标本及分离胶促凝管血清标本的血氨检测结果，结果表明，EDTA抗凝血浆与血清检测结果无显著差异，肝素血浆标本存在显著差异，不建议使用肝素抗凝血标本。Choy等人[47]的结果与Dairong等人的结论不尽相同，研究人员对比了EDTA、肝素血浆标本及促凝管血清标本的血氨检测结果，结果表明标本在4 ℃保存2小时，血氨检测结果均无显著差异，在4 ℃保存4小时后三种标本血氨开始显著上升，而且血清标本的血氨变化最为显著，分析原因，血氨变化在凝血过程已经开始，因此不建议使用血清标本进行血氨检测。

Goldstein等人[48]采用谷氨酸脱氢酶（GLDH）法评估了EDTA抗凝血浆在不同温度下储存时血氨的稳定性，结果表明血氨在4°C和−14°C下储存时呈线性增加，在−70°C下没有显著变化可稳定保持三周。Lindner等人[49]还探究了全血及血浆的保存条件，结果表明EDTA全血标本采集后在4℃保存，氨含量在6小时后没有显著增加，而在20-22℃保存，氨含量在3小时后已经显著增加；将EDTA全血分离出血浆，立即在4℃保存，3天后血氨值没有显著差异，而血浆立即在-20℃保存，90天后血氨值也没有显著变化。

综上，保存温度及时间是影响血氨检测结果准确性的重要因素，临床实验室应根据实验室条件设计适合的标本保存及运送方式，避免标本发生分析前变异，影响检测结果的准确性。

3.3 激素测定

血液中激素含量很低，主要采用各种免疫学技术进行测定,目前，化学发光免疫测定(chemiluminescent immunoassay , CLIA) 和电化学发光免疫测定(electrochemiluminescent immunoassay , ECLIA)是临床检测激素的主要技术。根据我国临床检验操作规程[6]的建议，EDTA抗凝管可适用于部分激素类检测项目，标本类型及稳定性见表3。

表3 激素测定标本类型及稳定性

注：表格中标本类型及稳定性信息为CLIA法、ECLIA法和TrFIA法的归纳总结，具体方法请参照原文或实际使用的检测试剂说明书。

3.4 血清B型利钠肽

血清B型利钠肽(B-type natriuretic peptide , BNP)是心衰的特异性指标物，对心力衰竭的诊断和预后有重要意义。我国临床检验操作规程[6]推荐使用EDTA抗凝血浆作为样本，不建议使用血清、肝素或柠檬酸钠抗凝血浆样本，且在玻璃试管中不稳定，推荐使用塑料采集管。样本2~8℃可保存24小时，长期保存应置于-20℃。

Santos等人[50]研究表明，0时刻肝素血浆中BNP浓度明显高于EDTA血浆中BNP浓度（平均值高65%），随着时间的推移，肝素血浆中BNP的稳定性下降（免疫反应性在最初的2小时内下降了约30%，在8小时后下降了60%）故肝素不能作为EDTA的替代抗凝剂。

血液标本采集后BNP的稳定性是研究人员关注的重要影响因素，Romualdo等人[51]研究表明蛋白酶抑制并不能保护BNP在室温下不被降解，建议全血标本采集后最好在4°C保存，且在4h内进行分离检测。

4.1细胞免疫

淋巴细胞与髓样细胞共同构成人体免疫细胞系统，其中，淋巴细胞是构成机体免疫系统的主要细胞群体，淋巴细胞是不均一的细胞群体，包括许多具有不同免疫功能的亚群，主要可分为T细胞、B细胞、NK细胞 (natural killer cells)及树突状细胞(dentritic cells ,DC)。

流式细胞术（Flow Cytometry，FCM）通过快速测定库尔特电阻、荧光、光散射和光吸收来定量测定细胞DNA含量、细胞体积、蛋白质含量、酶活性、细胞膜受体和表面抗原等许多重要参数，根据这些参数将不同性质的细胞分开，以获得供生物学和医学研究用的纯细胞群体。目前，流式细胞术是鉴定和表征淋巴细胞不同类型及不同分化过程的标准方法。各类淋巴对应的表面抗原见表4。

表4 淋巴细胞对应的表面抗原

流式细胞术进行细胞鉴定检测对象均为细胞表面或细胞内的抗原，因此血液标本需要抗凝预处理。我国卫生部发布的《流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群指南》[52]建议用于淋巴细胞亚群检测首选EDTA.K2/EDTA.K3抗凝真空采血管进行标本采集，亦可采用肝素钠抗凝或柠檬酸钠抗凝（ACD）的真空采血管进行采集，EDTA抗凝标本在室温下稳定保存12h~24h。超过30h标本中的粒细胞可能会减少，如果标本用血细胞分析仪同时进行白细胞计数和分类，则应当选择EDTA盐作为抗凝剂。

Claramae等人[53]用流式细胞仪对比了肝素、EDTA或ACD三种抗凝剂和室温保存对健康人和疾病人（AIDS和CLL）淋巴细胞表型的影响，结果表明，表明三种抗凝剂都可以用于流式细胞术外周血的短期（少于24小时）室温运输和储存，但储存在EDTA中的健康献血者的血液在储存96小时后，T细胞明显增多，B细胞明显减少，所以若运输时间较长，肝素或ACD是更佳的选择。在实际临床应用中，建议对EDTA抗凝血标本的保存条件及时长进行验证。

4.2病原体标志物检测

外源性病原体侵入机体后，病原体本身或游离的病原体抗原有的可能存在于血液循环中，如乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、HCV核心抗原，这些病原体的抗原，又可剌激机体的免疫应答，产生特异抗体。临床可通过血液标本中上述特异抗原或抗体定性测定，来确定患者是否感染了某种特定病原体。目前对病原体特异抗体的免疫测定主要方法有有酶联免疫吸附试验(enzyme-inked immunosorbent assay, ELISA)、化学发光免疫测定(chemiluminescence immunoassay , CLIA)。

我国血站操作规程[54]要求各血站进行血液采集时应同时留取血液检测的标本，其中包括输血相关传染病标志物的血清学和核酸检测。其中血清学检测即为病原体特异性抗体的检测。根据我国临床检验操作规程[6]的推荐，病原体特异性抗体检测标本首选为血清，而对于存在血浆中的标志性抗原或抗体的检测，也可使用EDTA、柠檬酸钠或肝素抗凝血浆进行检测。

Eia等人[55]对比了人血清及EDTA抗凝血浆、枸橼酸盐抗凝血浆中抗乙型肝炎表面抗原（anti-HBs）的定量检测结果，结果同样表明抗凝血浆标本的结果与血清标本无显著差异，可以使用血浆作为抗原检测标本。

Arai等人[56]验证了一种检测EDTA抗凝全血、血浆和血清中的HIV-1和HIV-2抗体的免疫层析快速检测方法，实验表明EDTA抗凝全血、血浆和血清样品进行免疫层析试验的特异性和敏感性均可符合检测接收要求。Lin等人[57]探究血浆与血清标本检测甲型流感病毒抗体结果的一致性，采用一致性指数kappa（kD）计算和Pearson相关系数评价血浆（EDTA血浆、肝素血浆）与血清的一致性和相关性，结果表明EDTA血浆和血清的kD为1.0，肝素血浆和血清的kD为0.85；EDTA血浆与血清的Pearson相关系数为0.87（p<0.01），肝素血浆与血清的Pearson相关系数为0.82（p<0.01），证明血浆尤其是EDTA抗凝血浆可代替血清用于bELISA试验。

综上，血清虽然是病原体特性抗原及抗体，尤其是抗体，的首选检测标本，但许多项目可以使用EDTA抗凝血标本进行检测，临床实验室如有必要，可根据前人相关研究、指南建议或自行验证确认是否进行替代。

4.3 肿瘤标志物检测

与病原体特征性抗原或抗体检测原理类似，研究发现，通过癌症特殊状态的特异性表面抗原可以高效鉴定癌症的种类及发展状态[58]。大部分肿瘤标志物推荐使用血清标本进行检测，胃泌素释放肤前体(pro-gastrin-releasing peptide, ProGRP)例外，因为在血液凝固过程中产生的内源性蛋白酶可能会降解血清中的ProGRP，所以我国临床检验操作规程[6]建议ProGRP检测使用血浆标本。且由于血清和血浆标本得到的检测结果可能不同，应当在结果报告中说明标本类型；对同一患者ProGRP连续检测时，必须使用相同类型的标本基质，以监控治疗反应或疾病进展状况。

5.1 病原微生物核酸检测

除了形态学和分离培养的鉴定手段，病原体微生物实验室检测方法主要包括上文提及的病原体抗原抗体等标志物相关检测免疫学技术、针对特定病原体基因检测的分子生物学技术。分子生物学技术所需样本量小、特异性高、灵敏性高、检测时间短，不但能有助于感染性疾病的确诊，还能确定病原体的基因型，在病原微生物的检测中占据了越来越重要的地位。

我国临床检验操作规程[6]对病原微生物核酸检测的标本建议为血清或血浆，我国血站操作规程[54]要求各血站进行血液采集时应同时进行相关传染病标志物核酸检测，并明确要求核酸检测标本管应使用无菌、无DNA酶、无RNA酶的真空采血管，宜采用含惰性分离胶的乙二胺四乙酸二钾（EDTA.K2或EDTA,K3）抗凝真空采血管，并要求标本采集后4小时内对全血标本进行离心分离血浆。我国行业标准《临床微生物学检验标本的采集和转运》[59]同样推荐血浆核酸检验标本采血管首选EDTA抗凝剂。

Tsui等[60]探究了血清及血浆标本中RNA稳定性，结果表明，在4℃下放置0、6和24小时的EDTA抗凝血液中获得的血浆RNA浓度无显著差异，未冷冻的血浆、冷冻解冻的血浆和解冻后室温下放置1 h的血浆中RNA浓度没有显著差异。

建议临床实验室或血站若采集标本后需要长时间运输，无法在短时间内分离出血浆，应对保存温度及时间进行验证。

5.2 其他基因检测

除广泛应用于病原体核酸检测，目前基因检测已应用于常见的染色体病及遗传性疾病基因检测、HLA基因分型、用药相关核酸检测等领域。我国临床检验操作规程[6]推荐的血液标本大多数均为血清、血浆标本。Lam等人[61]研究表明EDTA抗凝剂对PCR试验没有抑制作用，与肝素或柠檬酸盐相比保存血液标本时间更长，是核酸检测标本的首选抗凝剂。

6.1 EDTA依赖性血小板减少症

乙二胺四乙酸（EDTA）依赖性假性血小板减少症（EDTA-PTCP）是由于抗凝剂EDTA诱导血小板中的特殊蛋白使血小板发生凝集，且在全自动血液分析仪上检测时，其血小板计数出现假性减少的现象。EDTA依赖假性血小板减少症（EDTA-PTCP）是罕见现象（一般人群发生率大约0.1%）。这种现象的发生多因体内存在最适反应温度为0-4℃的抗血小板抗体，在EDTA存在时，该抗体通过识别血小板粘附受体GPⅡb/Ⅲa并触发络氨酸激酶途径，活化血小板，在体外表现为血小板聚集，最终导致血小板计数的假性减低。及时准确地鉴别这种假象是非常重要的，因为其很容易与其他威胁生命的真性血小板减少相混淆，导致血液疾病的误诊[62, 63]。

EDTA依赖假性血小板减少症，发生血小板聚集。解决方案是换抗凝剂用柠檬酸钠溶液，或者添加丁胺卡那霉素等药物解聚血小板重新测试，或者通过镜检读数[64]。

6.2 脂血症

脂血症或标本中存在大量脂蛋白可产生浑浊，可引起血红蛋白假性升高，对血红蛋白、红细胞比容、血型鉴定及交叉配血等EDTA抗凝血浆标本的检测项目均有不良影响。

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