实验试剂 PCR试剂 测序试剂 10 × PCR Buffer (mg²⁺ Plus)(R10T1，TaKaRa) EXOI (M0293L, Biolabs) rTaq(R10T1，TaKaRa) SAP (D2660A, TaKaRa) dNTPs Mix(Pharmcia分装) BigDye (4336913, ABI) d₂H₂O 5 X Bufer (4336699, ABI) 甲酰胺(4311320，ABI) 琼脂糖胶电泳试剂 琼脂糖Agarose (G-10， BIOWEST) 核酸染料GoldView (Amresco 分装) DNAMarker (DL2000 Plus, BM111,TransGen) 0.5xTBE溶液 聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)胶电泳试剂 丙烯酰胺(Acrylamatide, AB1032, Ultra pure, BIO BASIC INC) 过硫酸铵AP (Ammonium persulfate, A3678, Sigma) 甲叉-丙烯酰胺( Bis- Acrylamatide, BB0025, Ultra pure, BIO BASIC INC) 去离子甲酰胺(deionized formamid, F0606，生工生物) NaOH ( 分析纯，光复) 溴酚蓝(Bromophonel blue, B0126,Sigma) 二甲苯氰(Xylene cyanol FF, X4126,Sigma) 硅化剂(Plusone Repel Silane, 17-1332-01, Amersham. Biosciences) 反硅化剂(Plusone Bind silane, 17-1330-01, Amersham. Biosciences) TEMED (T9281, Sigma) 95%乙醇(10009134, 分析纯，沪试) 硝酸银(10018461,分析纯，国药化试) 甲醛(83012,分析纯，湖北奥生新材料科技有限公司) Tis粉(Tis Amino, 7861– Angus Chemical Company) 硼酸(10004818,分析纯，国药化试) EDTA (10009717,分析纯，沪试) 尿素(10023218,分析纯，国药化试) 1×TBE溶液 部分试剂配方 40%的丙烯酰胺胶母液配制 过硫酸胺(AP)的配制 丙烯酰胺380g
甲叉一丙烯酰胺20g
加60℃左右的d₂H₂O定容至1000ml,迅速搅拌至澄清透明。过滤后4℃保存。 终浓度10%，用分析天平称取4gAP粉末，加纯水40 ml,摇匀溶解，4C保存(不要超过2个星期，最好新鲜配制)。 上样用指示剂(10 x loading buffer)配制 5xTBE的配制 甲酰胺(deionized formamid) 500ml Tris粉 54 g 4 N NaOH 1.32 ml 硼酸(Boric acid) 27.5g 溴酚蓝( Bromophonel blue) 263mg 0.5M EDTA (PH7.9) 二甲苯氰(Xylene cyanol FF) 263mg 加d₂H₂O至 1000ml d₂H₂O 25ml 搅匀后室温保存，0.5和1xTBE溶液用此分别稀释10倍和5倍后用。 混匀后放在摇床上摇12小时，4℃保存。 4%的PAGE胺胶液配制          制一板胶用量     配制40版用量 5xTBE溶液     15ml     600ml 尿素     36.04g     1441.6g d₂H₂O      22ml     880ml 实际配置时每次配制40板用量，搅拌过夜后过滤，滤液4℃保存。