第九章酶免疫技术
酶免疫技术是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原,此结合物既保留了抗体或抗原的免疫学活性,同时又保留了酶对底物的催化活性。
常用酶的底物
1 HRP底物
(1)邻苯二胺OPD:橙黄色,加硫酸终止后呈棕黄色,最大吸收峰长492nm
(2)四甲基联苯胺TMB:ELISA中应用最广泛的底物;蓝色,加硫酸终止后变成黄色,最大吸收峰长450nm.
2 ALP底物
对-硝基苯磷酸酯p-NPP,作用后形成对硝基酚(黄色),最大吸收峰长405nm,NaOH作为反应终止剂
3 b-Gal
4-MUG,作用后形成4-甲基伞形酮4-MU,测量时需要荧光检测仪
酶标记抗体或抗原
戊二醛交联法
改良过碘酸钠法:是目前用于HRP标记抗原或抗体的最常用方法
固相载体
常用聚苯乙烯塑料作为微孔板,硝酸纤维素膜用作免疫印迹试验和斑点酶免疫吸附实验
包被:抗原或抗体结合在固相载体上的过程。抗原或抗体溶于缓冲液中,4℃过夜或37℃2h
封闭:1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清
膜载体的免疫测定
最常用:NC膜(硝酸纤维素膜)
免疫印迹法(IBT):临床应用 1检测ENA抗体
2艾滋病的确诊试验









