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npp底物是什么2025临床医学检验技术考试--免疫学检验(九)

第九章酶免疫技术

酶免疫技术是将酶与抗体或抗原结合成酶标记抗体或抗原,此结合物既保留了抗体或抗原的免疫学活性,同时又保留了酶对底物的催化活性。


常用酶的底物

1 HRP底物

(1)邻苯二胺OPD:橙黄色,加硫酸终止后呈棕黄色,最大吸收峰长492nm

(2)四甲基联苯胺TMBELISA中应用最广泛的底物色,加硫酸终止后变成色,最大吸收峰长450nm.

2 ALP底物

对-硝基苯磷酸酯p-NPP,作用后形成对硝基酚(黄色),最大吸收峰长405nm,NaOH作为反应终止剂

3 b-Gal

4-MUG,作用后形成4-甲基伞形酮4-MU,测量时需要荧光检测仪


酶标记抗体或抗原

戊二醛交联法


改良过碘酸钠法是目前用于HRP标记抗原或抗体的最常用方法


固相载体

常用聚苯乙烯塑料作为微孔板,硝酸纤维素膜用作免疫印迹试验和斑点酶免疫吸附实验


包被:抗原或抗体结合在固相载体上的过程。抗原或抗体溶于缓冲液中,4℃过夜或37℃2h

封闭:1%-5%的牛血清白蛋白或5%-20%小牛血清


膜载体的免疫测定

最常用:NC膜(硝酸纤维素膜)


免疫印迹法(IBT):临床应用  1检测ENA抗体

                                              2艾滋病的确诊试验


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