rspcr什么时候用柑橘黄龙病菌内参基因的筛选与评估

1.1.1 病原材料

采用病芽嫁接法将CLas接种到4种柑橘属植株上：十月橘(Citrus reticulata Blanco cv. Shiyue Ju)、柚(Citrus maxima)、年橘(Citrus reticulata Blanco cv. Nian Ju)及柠檬[Citrus limon (L.) Burm. F.]，每个种3个生物学重复。病芽材料来自本实验室同一带黄龙病的植株，柑橘材料于防虫网室内自然条件下培养，常规水、肥、药剂管理。在嫁接后3、6、9、12及18个月从每个植株上分别随机采集带有典型黄龙病症状的叶片作为待检样品。阴性对照样品来自4种健康柑橘植株叶片。剪取每个样品的一部分叶片用液氮速冻后，于−80 ℃保存备用；另一部分于4 ℃保存备用。

1.1.2 主要试剂和仪器

E.Z.N.A.^® High Performance (HP) Plant DNA Midi Kit和E.Z.N.A.^® Plant RNA Kit，Omega Bio-Tek公司；TransScript^® One-Step gDNA Removal and cDNA Synthesis SuperMix，TransGen Biotech公司；Bestar^® Sybr Green qPCR Master Mix，DBI^® Bioscience公司。NanoDrop^TM One微量紫外-可见光分光光度计，Thermo Fisher Scientific公司；CFX Connect^TM Real-Time PCR Detection System，Bio-Rad公司。