胆固醇代谢（精选三篇）
1 ABCA1概述
ABCA1是三磷酸腺苷结合盒转运体超家族成员之一, 属细胞膜脂类转运体, 它们以三磷酸腺苷 (ATP) 为能源转运各种底物, 如离子、脂类和细胞毒素等。ABCA1可在脂肪细胞明显表达, 能促使细胞内胆固醇和磷脂转运至无脂或贫脂的载脂蛋白AI, 以合成HDL, 促进胆固醇逆转运。ABCA1是近年来新发现的启动细胞内胆固醇外流、形成HDL、增加RCT的关键基因[1]。对脂质代谢和动脉粥样硬化的发生及发展具有重要影响。
2 ABCA1的结构
ABCA1基因位于9q31, 约149 kb, 包括:1453bp启动子、146581bp外显子和内含子 (外显子50个, 内含子49个) 。位于转录起点上游的启动子区有多个转录因子结合位点[2], 其所编码的ABCA1是由2 261个氨基酸组成的膜蛋白, 分子量254 k Da, 含有两个跨膜区和两个核苷酸结合区。每个跨膜区含有6个螺旋结构, 核苷酸结合区位点与ATP结合, 为跨膜转运提供能量, 中间是具有高度疏水性调节域[3]。
3 ABCA1的分布与功能
ABCA1基因主要在巨噬细胞、肝脏、胎盘、脑、肾、肠、动脉血管壁等组织中表达。随着对Tangier病 (TD) 、家族性HDL缺乏症 (FHD) 发病机制的阐明, 现已明确ABCA1的主要功能是参与胆固醇逆转运。正常外周细胞 (单核/巨噬细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞等) 膜上的ABCA1首先介导细胞内的磷脂流出, 并与细胞外的载脂蛋白AI (apo AI) 结合形成盘状的磷脂-apo AI复合物, 然后细胞内的胆固醇通过扩散跨膜流出, 被盘状的磷脂-apo AI复合物捕获, 形成前β-HDL, 在卵磷脂胆固醇脂酰转移酶 (LCAT) 的作用下, 转变成富含胆固醇酯的球状的成熟HDL[4], 由此启动胆固醇逆转运过程。
4 ABCA1基因的表达与调控
4.1 ABCA1的启动子调控
对人类和小鼠ABCA1基因的克隆及其启动子的特征进行分析, 发现并证实启动子区存在DR-4、锌手指蛋白202 (ZNF202) 、TATA Box、GC-Box、E-Box、Sp1等调控元件。胆固醇和 (或) c AMP刺激Sp1、E-box结合因子等结合到近侧启动子, 来源于脂蛋白的固醇或氧化固醇可刺激肝X受体 (LXR) /视黄酸X受体 (RXR) 与启动子区的DR-4结合, 以上两种机制均可诱导ABCA1基因转录, 尤其后者。而ZNF202可抑制ABCA1启动子的活性, 抑制ABCA1的表达。
4.1.1 锌手指蛋白202 (ZNF202)
ZNF202是多种与脂质转运和脂蛋白代谢相关基因的转录阻遏物。这些基因的启动子区域具有相同的重复Gn T结构, ABCA1也不例外, 它的启动子区域的重复Gn T结构位于-210/-229.另外, 在ABCA1的启动子区域的-9l和-157位点还含有两个GC盒。ZNF202除可与ABCA1的Gn T结构结合外, 它的Sp1和Sp3还可分别与ABCA1的GC盒结合, 从而共同阻遏启动子活性。
4.1.2 肝脏X受体/类维生素AX受体 (LXR/RXR)
LXR和RXR均属于核受体超家族。核受体是细胞内的转录因子, 当配体与它们结合后, LXR/RXR二聚体结合到ABCA1基因启动子的识别序列DR-4上, 促进靶基因转录[5]。
4.2 c AMP对ABCA1基因表达的调控
c AMP可平行增加ABCA1m RNA、蛋白质表达以及胆固醇外流率[6,7,8]。其机制可能是c AMP与ABCA1基因上的c AMP反应元件结合, 促进ABCA1基因转录。
4.3 胆固醇在ABCA1表达中的调控作用
增加巨噬细胞和成纤维细胞内胆固醇含量可显著增加ABCA1的表达并提高载脂蛋白介导的脂质流出。除了胆固醇外, 羟固醇也明显诱导巨噬细胞ABCA1表达。生理情况下, 进入细胞内的胆固醇, 特别是氧化型低密度脂蛋白胆固醇以及乙酰化低密度脂蛋白胆固醇, 均可引起ABCA1m RNA和蛋白质表达的增加[9,10]。
4.4 炎性因子对ABCA1的作用
白介素1 (IL-1) 可能通过抑制基因的表达而减弱ABCA1m RNA表达以及胆固醇和脂质向载脂蛋白转运[11]。肿瘤坏死因子-γ (IFN-γ) 可减少小鼠巨噬细胞和泡沫细胞中ABCA1m RNA表达以及胆固醇和脂类向载脂蛋白转运[12], 从而促进巨噬细胞向泡沫细胞转化, 加速动脉粥样硬化的进程。
4.5 ABCA1与HDL的代谢
由ABCA1介导胆固醇流出的步骤可知, ABCA1能促进前β-HDL的形成, 在LCAT的作用下, 转变成富含CE的球状的成熟HDL.因此, ABCA1在HDL的成熟中具有重要作用。如果ABCA1基因突变, 不能介导胆固醇和磷脂的流出, 则apo AI不能捕获胆固醇和磷脂, 从而不能形成盘状的前β-HDL, apo AI很快就被肾脏摄取代谢[13,14]。国内外研究表明:ABCA1单核苷酸多态性 (SNP) 在人群中普遍存在。ABCA1基因突变可能导致多种代谢酶、载脂蛋白活性以及脂蛋白颗粒的大小发生改变, 进而影响胆固醇逆转运过程, 引起机体脂代谢紊乱[15,16]。ABCA1介导胆固醇外流可能通过两种模式: (1) 两步转运模式:ABCA1首先催化磷脂转运到脂蛋白上形成复合物, 该复合物再从胆固醇富集区域 (小凹中) 转运胆固醇并在脂酰辅酶A胆固醇脂酰转移酶 (ACAT) 作用下形成HDL. (2) 膜溶解模式:磷脂和胆固醇同时流向脂蛋白, 形成复合物而转移大量胆固醇。该模式主要在外周组织发挥作用, 从而有效减少脂质在动脉壁细胞的蓄积。
5 ABCA1与AS
普遍认为胆固醇和胆固醇脂在巨噬细胞内聚积对AS形成起重要作用。影响胆固醇流入与流出之间平衡的因素必然是促进AS或抗AS因素。流行病学研究显示HDL水平与AS呈高度负相关。血浆低HDL水平, 高LDL-C水平是心血管疾病的独立危险因子, 因此促进胆固醇流出和提高血浆HDL水平可降低AS的危险性。ABCA1介导的途径不仅可以促进巨噬细胞内胆固醇的流出, 而且能够提高血浆HDL水平。有研究表明:高表达ABCA1的转基因小鼠可以升高血HDL水平, 降低LDL, 增加HDL介导的胆固醇流出至肝脏, 从而降低动脉粥样硬化的危险性[17]。
6 结语
一、单项选择题（共27题，每题的备选项中，只有 1 个事最符合题意）
1、全口义齿初戴时，义齿不稳定的原因很多，除了
A．上颌硬区处基托组织面未做缓冲
B．外斜嵴处基托组织面未做缓冲
C．下颌隆突处基托组织面未做缓冲
D．基托变形
E．一侧上颌结节过大
2、避免用高压蒸汽灭菌法消毒灭菌的器械是 A．优质不锈钢器械 B．耐高温消毒手机 C．布类 D．针头 E．玻璃杯
3、下颌骨骨折不易发生的临床体征是____ A．咬合关系紊乱
B．眼镜征
C．骨折异常动度
D．出血和血肿
E．牙龈撕裂
4、下列低血钾的临床表现中，不正确的是 A．心律失常 B．腹胀、肠麻痹
C．肌肉软弱无力，甚至四肢软瘫 D．尿量明显减少 E．神志淡漠，疲乏
5、急性化脓性根尖周炎时，下列哪种排脓方式对根尖周组织破坏最小 A．通过根尖孔经根管从冠部缺损处排脓 B．通过牙周膜从龈沟或者牙周袋排脓 C．通过骨髓腔突破骨膜、皮肤向外排脓 D．通过骨髓腔突破骨膜、黏膜向外排脓 E．突破鼻底黏膜向鼻腔排脓
6、下颌第三磨牙阻生适宜做龈瓣切除术的情况是 A．水平阻生，冠周炎反复发作
B．垂直阻生，升支前方有足够空隙，对颌牙位置正常 C．前倾阻生，前方邻牙远中龋坏 D．前倾阻生，龈瓣上有咬痕 E．颊向阻生，对牙位置正常
7、”病人仰卧在躺椅上畅所欲言，治疗者在倾听和询问中解释病人的潜意识、情绪或幼年的特殊生活事件的方法”称为
A．梦的分析
B．自由联想
C．系统脱敏
D．厌恶疗法
E．生物反馈
8、主要是为了
A．增强义齿固位
B．防止咬颊、咬舌
C．提高咀嚼效率
D．提高义齿稳定
E．有利于美观
9、以下哪项不是基托缓冲的目的 A．防止压痛 B．防止有碍发音 C．防止压迫牙龈
D．防止压伤黏膜组织 E．防止基托翘动
10、关于牙釉质龋，以下哪项不正确
A．微晶的溶解可从晶体的中央开始
B．早期病损脱矿主要发生在表层
C．平滑面龋早期表现为灰白色不透明区
D．窝沟龋的损害性质与平滑面龋相同
E．扫描电镜下见病损区釉柱间隙和晶体间微隙均增宽11、12、下列哪项不是简单功能性矫治器 A．下颌塑料联冠式斜面导板 B．前庭盾 C．平面导板 D．Activator E．上颌斜面导板
13、可能发生龋病的危险信号不包括 A．致龋菌数量变化 B．牙龈出血
C．菌斑内酸性产物量
D．菌斑内及唾液内pH值，糖代谢反应 E．唾液缓冲能力 14、1名12岁儿童由饮水含氟量0.3ppm地区迁居饮水含氟量1.2ppm地区，氟牙症发生的可能性为 A．0 B．25% C．50% D．75% E．100%
15、被甲类传染病病原体污染的污水、污物、粪便，有关单位必须按照以下规定进行处理
A．在卫生防疫机构的指导监督下进行严密消毒后处理
B．在卫生防疫机构的指导监督下进行消毒后处理
C．在卫生防疫机构的指导下进行消毒后处理
D．由卫生防疫机构进行消毒后处理
E．由卫生防疫机构进行严密消毒后处理
16、支气管哮喘的临床症状主要是
A．吸气性呼吸困难
B．反复发作、阵发性、呼气性呼吸困难
C．反复发作、混合性呼吸困难
D．夜间阵发性呼吸困难
E．肺部有较多的哮鸣音
17、氯沙坦降压作用是
A．拮抗ATⅡ受体活性
B．减少血液缓激肽水平
C．拮抗ACE的活性
D．拮抗肾素活性
E．增加血液血管紧张素Ⅱ水平
18、牙体硬组织中氟含量由高向低正确顺序是 A．釉质表层＞牙本质＞釉质深层
B．牙本质＞釉质表层＞釉质深层
C．牙本质＞釉质深层＞釉质表层
D．釉质表层＞釉质深层＞牙本质
E．釉质深层＞釉质表层＞牙本质
19、主要起清洁牙龈而非按摩牙龈的方法是 A．改良的stillman法
B．Charter法
C．圆弧法
D．旋转刷牙法
E．以上均不是
20、临床上表现为白色、非均质口腔黏膜病变，镜下见上皮层内的全部细胞均呈非典型性，即细胞恶变，而基底膜尚完整，此病例的诊断应为 A．原位癌
B．浸润性癌
C．上皮中度异常增生
D．角化不良
E．红斑
21、任何单位或者个人开展诊疗活动，必须依法取得 A．《设置医疗机构批准书》
B．《设置医疗机构备案回执》
C．《医疗机构执业许可证》
D．《医疗机构校验申请书》
E．《医疗机构申请变更登记注册书》
22、翼外肌在髁突上的附着处，其结构名称是 A．前斜面 B．后斜面
C．髁突外侧的粗糙面 D．髁突内侧 E．关节翼肌窝
23、患者，女性，48岁，左舌缘溃烂3个月。活检病理报告为“高分化鳞癌”。检查见左舌缘一1.0cm×1.0cm，菜花状溃疡，同侧下颌下淋巴结肿大，直径大于3cm、小于6cm，胸片、腹部 B超阴性。按UICC、TNM分类分期，应是 A．T1N0M0
B．T2N0M0
C．T3N0M0
D．T4N0M0
E．T1N2M0
24、确定垂直距离的方法中，最可靠的方法是 A．面部距离均等测定法 B．面部外形观察法 C．息止聆位测定法 D．拔牙前记录 E．以旧义齿参考
25、妊娠期妇女了解妊娠期间口腔疾病及预防基本知识的目的是
A．建立良好口腔卫生习惯
B．定期检查
C．适时治疗
D．保证妊娠期妇女的全身及口腔健康
E．以上目的均对
26、县医院接乡下电话，急要救护车接产后大出血病人，院值班干部通知了司机，便没再催促。司机接通知后，称风小些再去，病人家属着急，在要车40分钟后，在公路上截了一辆农用四轮车拉到县医院，20分钟到县医院，门诊医师直接送到病房，病房医师按失血休克紧急处置，30分钟病人死亡。此事故的责任主体是
A．值班干部
B．救护车司机
C．门诊医师
D．病房医师
E．以上都不是
27、医疗机构发现发生或者可能发生传染病暴发流行时，应当
A．在1小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
B．在2小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
C．在4小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
D．在6小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
E．在8小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
28、患者，女，68岁，右上第一磨牙残冠需要拔除。有心律失常病史，但近2年病情平稳，少有发作。拔牙时麻醉药宜选用
A．2%普鲁卡因
B．2%含肾上腺素普鲁卡因
C．2%利多卡因
D．2%含肾上腺素利多卡因
E．2%地卡因
二、多项选择题（共27题，每题的备选项中，有 2 个或 2 个以上符合题意，至少有1 个错项。）
1、面点隙沟裂易致食物滞留
C．牙釉质、牙本质钙化度低
D．不易形成修复性牙本质，龋蚀进展快
E．儿童以软食和粘食为主
2、以下不是梅毒的临床分型的一项是
A．三期梅毒
B．先天梅毒
C．梅毒下疳
D．一期梅毒
E．二期梅毒
3、面部皮肤癌较多见的是
A．腺上皮癌
B．未分化瘤
C．基底细胞癌
D．鳞状细胞癌
E．淋巴上皮癌
4、甲状腺功能亢进症危象的主要临床表现是 A．心率加快、血压高、头晕、头痛 B．心率，160次/分、体温＞39℃、腹泻 C．心悸、气促、呕吐、腹泻
D．发绀、鼻冀扇动、心悸、出汗 E．面色苍白、四肢厥冷、呼吸困难
5、某学龄儿童采用0.05%NaF漱口水预防龋齿，其使用方法应为 A．每月含漱一次，每次10ml，含漱1分钟 B．每周含漱一次，每次10ml，含漱1分钟 C．每天含漱一次，每次10ml，含漱1漱分钟 D．隔周含漱一次，每次10ml，含漱1分钟 E．隔天含漱一次，每次10ml，含漱1分钟
6、女性，50岁，10d前做胆道手术。近2d来时有突然寒战，体温38～39℃。间歇期体温接近正常。查血常规示白细胞 8.5×109/L，中性0.70。血培养阳性。考虑为
A．真菌所致全身性感染
B．革兰阴性细菌所致全身性感染
C．无芽胞厌氧菌所致全身性感染
D．革兰阳性细菌所致全身性感染
E．以上都不是
7、受理执业医师注册申请的卫生行政部门，对于应当准予注册的，应当在收到申请之日起多少日内准予注册 A．7日内 B．10日内 C．15日内 D．30日内 E．60日内
8、具有缩瞳作用的药物除外
A．毛果芸香碱
B．新斯的明
C．毒扁豆碱
D．筒箭毒碱
E．乙酰胆碱
9、日光放射状阴影是哪种肿瘤的典型表现____ A．成骨性骨肉瘤
B．尤文肉瘤
C．骨纤维肉瘤
D．中央性颌骨癌
E．骨化纤维瘤
10、乳磨牙萌出最佳窝沟封闭时间是 A．1～2岁
B．2～3岁
C．3～4岁
D．4～5岁
E．整个乳磨牙期均可
11、对放射线不敏感的肿瘤是____ A.鳞状细胞瘤
B.恶性淋巴瘤
C.未分化癌
D.恶性淋巴上皮瘤
E.骨肉瘤
12、下列根尖周疾病中X线检查根尖周组织影像无明显异常的是 A．根尖周囊肿 B．根尖周肉芽肿
C．急性浆液性根尖周炎 D．急性根尖周脓肿 E．根尖周致密性骨炎
13、关于牙龈瘤和牙龈癌的鉴别诊断，关键依据是 A．伴有牙槽骨吸收及牙周膜间隙增宽 B．多见于唇、颊侧的牙龈乳头 C．牙龈表面溃疡，易出血 D．组织病理学确诊
E．累及的牙齿可能松动或移位
14、以下有关灭菌法的叙述中，错误的是 A．灭菌法是指杀死或除去所有微生物的方法 B．灭菌方法的可靠性可用F0值验证 C．灭菌效果以杀死微生物的繁殖体为准
D．微生物的种类不同，使用的灭菌方法也不同 E．灭菌方法可采用物理方法或化学方法
15、不属于思维形式障碍的是 A．思维散漫 B．赘述症 C．持续语言 D．思维中断 E．思维化声 16、3岁儿童点隙裂沟龋占牙面患龋总数的
A．50%
B．67%
C．74%
D．80%
E．78%
17、某患者，一上中切牙冠折，牙冠缺损1/4，未露髓，金属烤瓷冠修复。粘固两个月后出现自发痛，冷热刺激加重。最可能的原因是
A．急性牙髓炎
B．创伤性咬合C．慢性根尖周炎
D．慢性牙周炎
E．牙本质过敏
18、目前关节内强直最多见的原因是 A．感染性炎症
B．关节损伤
C．类风湿关节炎
D．面部烧伤
E．颞下窝肿瘤放射治疗后
19、形成牙髓的组织是
A．上皮根鞘
B．牙乳头
C．上皮隔
D．成釉器
E．牙囊
20、患者，女性，33岁，近1～2年来自觉全口多数牙齿松动，咀嚼力量减弱。若诊断为快速进展型牙周炎，临床检查最有可能的发现是 A．多数牙齿移位
B．多发的牙周脓肿
C．磨牙根分叉病变Ⅲ度
D．多数牙槽骨中至重度吸收
E．多数牙牙龈退缩明显
21、位置低于咬合面，牙冠缩短，松动Ⅰ°，龈有少许撕裂，牙外伤的诊断是 A．牙挫伤
B．牙脱位
C．冠折
D．根折
E．冠根折
22、牙槽龈组纤维（）
A．纤维起于牙槽嵴顶，呈放射状向牙冠方向走行 B．自牙颈部牙骨质，向牙冠方向散开，广泛地位 C．自牙槽嵴向冠方牙龈固有层展开，止于游离龈 D．起自根分叉处的牙根间骨隔顶，至根分叉区牙 E．自牙颈部的牙骨质，越过牙槽嵴，止于牙槽突
23、一位女医生声调柔和，目光亲切，讲话面带微笑，她在下列哪方面做得好 A．言语沟通 B．非言语沟通
C．言语沟通和非言语沟通 D．目光沟通 E．以上都不是 24、18-8不锈钢丝的主要成分是
A．18%镍和8%铬
B．18%钴和8%铬
C．18%铬和8%镍
D．18%钴和8%镍
E．8%镍和8%钴
25、确诊脓肿形成的最可靠依据是
A．血培养
B．穿刺
C．触诊
D．测体温
E．透视
26、县医院接乡下电话，急要救护车接产后大出血病人，院值班干部通知了司机，便没再催促。司机接通知后，称风小些再去，病人家属着急，在要车40分钟后，在公路上截了一辆农用四轮车拉到县医院，20分钟到县医院，门诊医师直接送到病房，病房医师按失血休克紧急处置，30分钟病人死亡。此事故的责任主体是
A．值班干部
B．救护车司机
C．门诊医师
D．病房医师
E．以上都不是
27、医疗机构发现发生或者可能发生传染病暴发流行时，应当
A．在1小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
B．在2小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
C．在4小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
D．在6小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
E．在8小时内向所在地县级人民政府卫生行政主管部门报告
28、患者，女，68岁，右上第一磨牙残冠需要拔除。有心律失常病史，但近2年病情平稳，少有发作。拔牙时麻醉药宜选用
A．2%普鲁卡因
B．2%含肾上腺素普鲁卡因
C．2%利多卡因
D．2%含肾上腺素利多卡因
1材料与方法
1.1材料与试剂
MPPP由本室制备(醇提法提取、大孔树脂纯化[7],花色苷色素总量约92%[1]);氟化钠(分析纯):购自国药集团;TC、TG、LDL-c和HDL-c测试盒:购自温州维 日康生物 科技有限 公司 ;RNAiso Plus、 Prime ScriptTMRT reagent Kit with g DNA Eraser和SYBRPremix Ex TaqTMII试剂盒:购自大连宝生物工程有限公司。
1.2仪器与设备
T3型PCR仪,德国Biometra公司;7300型real-time PCR仪,美国ABI公司;日立7170A型全自动生化分析仪,日本日立公司;2000C型Nano Drop分光光度计,美国Thermo公司。
1.3动物及饲养
4周龄雌性断乳SD大鼠40只,体重50~80 g, 由中国医科大学实验动物中心提供,许可证号: SCXK(辽)2003-0009。饲养条件:室温(20±2)℃,相对湿度55%~65%,自然采光。每笼2只大鼠,自由饮水及摄食。动物饲料按实验分组需要,添加不同含量的MPPP,由沈阳市前民饲料厂制备。
1.4动物分组与处理
大鼠适应性喂养1周后,按照体重均衡的原则随机分为四组:对照组、氟中毒组、低剂量色素干预组和高剂量色素干预组。对照组饮用自来水(F-浓度为0.4536 mg/L),饲以普通饲料;氟中毒组、低剂量色素干预组和高剂量色素干预组均饮用含氟化钠的自来水 (F-浓度为100 mg/L),同时分别饲以MPPP含量为0、5和10 g/kg的动物饲料。实验周期共12周。实验结束后,2%戊巴比妥钠腹腔麻醉,腹主动脉采血,3 500 r/min离心,10 min后取上清备用;迅速摘取大鼠肝脏,液氮冷冻后 -80℃冻存。
1.5指标及检测
1.5.1氟含量测定血清用等体积的总离子强度调节缓冲溶液稀释后,采用氟离子选择电极法测定氟含量;肝组织氟含量测定采用酶标仪 – 氟试剂分光光度法[8],取肝组织0.05 g,脂肪酶和蛋白酶消化后, 随即加入硝酸银 – 硝酸混合溶液,并迅速盖上已用饱和Na OH溶液涂成碱膜的干燥盖子,55℃恒温箱中扩散24 h,加入显色剂150μl,用酶标仪于630 nm波长处测定肝组织中的氟含量。
1.5.2血脂测定血清总胆固醇 (total cholesterol, TC)、总甘油三酯(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇 (low density lipoprotein cholesterol,LDL-c) 和高密度脂蛋白胆固醇 (high density lipoprotein cholesterol,HDL-c)采用试剂盒方法,按照说明书要求用全自动生化分析仪测定。血清TC、TG采用氧化酶法,HDL-c、LDL-c采用直接法进行检测。
1.5.3肝脏胆固醇代谢基因m RNA的表达1总RNA的提取:采用RNAiso Plus提取肝组织总RNA,操作按RNAiso说明书进行,用Nano Drop分光光度计检测总RNA提取液,分别计算各样品的纯度和浓度。2逆转录反应:按照Prime Script逆转录说明书,在PCR仪上进行c DNA合成,反应参数为: 37℃ 15 min,85℃ 5 s,4℃保存。3引物合成:从Genebank中查找大鼠3- 羟基 -3- 甲基戊二酸单酰辅酶A还原(3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A reductase,HMG-Co AR)、 胆固醇7α- 羟化酶 (cholesterol 7-alpha hydroxylase,CYP7αl)、低密度脂蛋白受体(low density lipoprotein receptor,LDLr) 和内参 β-actin的基因序列,引物由宝生物(大连) 工程有限公司设计并合成。引物序列及产物大小, 见表1。4荧光定量PCR反应:应用SYBRPremix Ex TaqTMII试剂盒进行实时定量PCR,20μl的PCR反应体系按说明书配置。实时定量PCR扩增标准程序:95℃预变性30 s;PCR反应95℃变性5 s, 60℃退火31 s,共40个循环。PCR数据分析采用2-△△CT法。
1.6统计学分析
所有数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析。 计量数据采用均数±标准差(±s)表示。组间比较采用方差分析,检验水准为 α=0.05。
2结果
2.1氟中毒模型的建立
实验结束时,对照组大鼠血氟和肝氟含量均明显低于其他各组(P <0.01),提示氟中毒大鼠模型建立成功(表2)。
(n =3,±s)
注:覮,P <0.01
2.2血脂结果
由表3可见,与对照组比较,氟中毒组血清TC含量明显增高(P <0.05),LDL-c增加了17%;而与氟中毒组相比,低、高剂量色素干预组血清TC含量分别降低了10%和4%,LDL-c分别降低了16%和4%。
(n =10,mmol/L,±s)
注:覮,P <0.05
2.3胆固醇代谢基因mRNA的表达
表4中,低、高剂量色素干预组大鼠肝脏CYP7α1和LDLr m RNA表达水平均高于氟中毒组,且只有高剂量色素干预组有统计学意义 (P < 0.05)。各指标溶解曲线和扩增曲线见附图。
(n =10,±s)
注:覮,P <0.05
A:CYP7α1;B:HMG-CoAR;C:LDLr;D:β-actin;E:扩增曲线
3讨论
慢性氟中毒是一种全身性疾病,除引起氟斑牙和氟骨症外,对多种软组织和器官均有不同程度的损伤。肝脏是机体参与解毒和脂质代谢的重要器官,氟中毒可引起肝脏功能异常,同时伴有脂代谢障碍[5]。本研究与VASANT[9]结果一致,过量氟摄入诱发大鼠高胆固醇血症。高胆固醇血症是动脉粥样硬化和冠心病发生发展的重要危险因素,而降低血中TC水平可显著减少心血管病的发生[10,11]。笔者发现, 在MPPP的干预下氟中毒大鼠血清TC和LDL-c含量均呈现不同程度的下降,这就提示MPPP参与了机体胆固醇的代谢过程。
肝脏作为人体胆固醇合成、摄取、转化的主要场所,主要从两个方面调节胆固醇代谢:1在酶的作用下完成内源性胆固醇的生物合成;2催化胆固醇分解为胆汁酸并排出体外。HMG-Co AR作为内源性胆固醇合成的限速酶[12],其表达水平直接关系到体内胆固醇合成的数量。本次实验结果显示,MPPP对氟中毒大鼠肝脏HMG-Co AR m RNA的表达无明显作用。同样,国外学者用富含花色苷的泰国黑米提取物培养Hep G2细胞,HMG-Co AR m RNA的表达也未发生改变[13]。这就提示,花色苷并不影响胆固醇的内源性合成,而促进胆固醇的分解代谢可能是其降胆固醇的主要途径。
事实上,血液中70%的胆固醇由LDL和极低密度脂蛋白携带,其中90%的LDL是通过和肝细胞膜上丰富的LDLr结合,完成胆固醇的细胞内吞噬作用[14]。而肝脏中的胆固醇必须在限速酶CYP7α1参与下,方可转化为胆汁酸[15]。因此,LDLr和CYP7α1在维持胆固醇稳态及胆汁酸合成中发挥着重要作用。笔者发现,MPPP可同时上调氟中毒大鼠肝脏LDLr和CYP7α1 m RNA表达,这更有利于促进胆固醇在肝细胞内的转化。此结果在细胞实验中也得到了证实[4,13],值得一提的是,WANG[4]用矢车菊 -3葡萄糖苷处理小鼠原代肝细胞时,发现CYP7α1表达的增加,并与肝X受体 α 呈依赖性,认为花色苷促进CYP7α1表达是通过其上游调控因子肝X受体 α 实现的。至于MPPP的上调作用是否与肝X受体 α 有关,尚需进一步证实。
