作者：宠物医师网编委会
点击阅读作者更多临床文献
自动化血液分析仪需联合人工血涂片复核进行血小板计数，尤其针对存在出血性疾病的患宠。
摘要
人工血涂片评估对验证自动化血小板计数至关重要，尤其在血小板减少症（thrombocytopenia）诊断中。血小板评估是出血性疾病诊疗的首要环节，此类疾病多因血小板数量/功能缺陷（原发性凝血障碍）或凝血因子异常（继发性凝血障碍）引起[1]。由于凝血障碍常为多因素致病，需综合评估样本采集技术、血小板聚集程度、估算血小板计数及形态学特征。
一、引言
血小板（旧称血栓细胞）起源于骨髓中的巨核细胞，但大多数血小板并不在循环系统中，而是储存在脾脏。
大多数犬猫的血小板寿命为4至6天，但在脾切除患者中可能发生变化。由于脾脏负责清除老化血小板，脾切除患者的血小板寿命可延长至8天[3]。
血小板在凝血的初始阶段至关重要，其功能包括形成血小板栓、促进凝血因子结合以及抑制血管损伤部位的抗凝因子[1]。因此，血小板分析对评估出血性疾病患者具有重要意义。自动化血液分析仪能比人工方法更精准地评估血小板计数，但在凝血障碍疾病中各种“伪影”可能影响其准确性[2]。
二、样本采集
正确采集与保存血液样本是后续血液分析的基石。血小板计数应在样本采集后5小时内进行 [2] 。
当血液形成凝块时，凝血因子被激活，血小板被消耗；因此，需将血液采集至含抗凝管中，以评估血小板数量、形态及功能。制作血涂片和进行犬猫自动化血小板计数的首选抗凝剂是EDTA，EDTA可确保最佳染色效果和最小样本稀释。然而，据报道EDTA可能导致血小板聚集；将EDTA样本预热至37°C（98.6°F）可减少聚集[4,5] 。
在猫中，使用枸橼酸盐采血可能减少血小板聚集，但犬中无效[6-8]。需注意，枸橼酸盐采血管会使样本稀释10%，因此血小板计数需校正稀释效应[3]。
此外，在血液样本中添加阿米卡星也可解聚血小板团块[9]。若无法立即进行全血细胞分析（CBC），建议冷藏样本以增强血小板聚集。
送检建议：应在采样时制备2张未染色、自然风干的血涂片，并与血液样本一同。血液样本需恢复至室温，并在放入血液分析仪前轻柔颠倒混匀[5,6]。
三、血小板评估
血小板聚集是导致血小板计数假性降低（假性血小板减少症）的最常见原因。聚集通常归因于采样不当（如未及时将血液转移至抗凝管、混匀不足或创伤性采血）[10]。体外血小板聚集可能发生在采血过程中，尤其是猫[3]。
若存在血小板聚集，则无法获得准确的血小板计数。通常情况下，分析仪不会分类血小板团块，但较小的团块可能被误计为白细胞[11]。维护良好的血液分析仪的自动化血小板计数（针对哺乳动物）比人工计数更准确。建议通过人工血涂片复查辅助自动化血小板计数，尤其是当报告的血小板减少症低于检测灵敏度下限（5000-20 000血小板/µL）时[2,3]。
步骤1：寻找血聚集小板
在低倍镜下（10×或20×物镜），扫描血涂片的羽状边缘及周边区域以寻找血小板聚集（图1A）。同时检查涂片的其余区域，因为血小板聚集也可能出现在单层区（图1B）。脱颗粒后，血小板可能与嗜碱性碎片难以区分（图1C和1D）。
图1. 犬血涂片（A）羽状边缘的血小板聚集团块；200×，瑞氏-吉姆萨染色。（B）单层区内的血小板聚集；脱颗粒血小板聚集团块位于（C）羽状边缘及（D）单层区。500×，瑞氏-吉姆萨染色。
步骤2：估算血小板数量
估算血小板是评估疑似血小板减少症患者的重要初始方法，但操作者误差和血小板在涂片中的分布差异可能导致结果波动较大[13]。此外，若观察到大量或大型血小板聚集，涂片估算值可能假性偏低。
估算方法：在单层区的10个高倍视野（100×物镜）中计数血小板，计算平均值，再乘以校正因子15 000（犬）或20 000（猫），即可得出每µL血小板的估算数量[13,14]。
步骤3：评估血小板形态
正常血小板呈圆形、无核，胞质淡蓝色，内含大量小而圆至不规则形状的粉紫色颗粒（图2A）。激活时，血小板由圆形变为椭圆形，并伸出丝状伪足（图2B）。激活后颗粒常聚集于中央，易被误认为细胞核。需注意与淋巴性白血病或循环性淋巴瘤患者的胞质碎片区分（图2C）。前血小板（proplatelet）偶见，表现为细长形血小板[15]。
图2.（A）犬血涂片单层区的血小板（箭头）。（B）猫血涂片单层区的血小板，含活化血小板（框内）。（C）白血病患猫血涂片中的胞质碎片（框内）。（D）查理士王小猎犬血涂片中的巨血小板。500倍放大，瑞氏-吉姆萨染色。
血小板大小（以血液分析仪中的平均血小板体积MPV表示）存在种内和种间差异：
犬：血小板远小于红细胞（约7 µm，直径2–4 µm）。
猫：血小板大小不一（2 µm至接近红细胞大小，约6 µm）[10]。
MPV升高可能提示非免疫介导的再生性血小板减少或炎症状态下的血小板生成增加，也见于髓系肿瘤和FeLV阳性血小板减少症患猫[3]。某些犬种（如查理士王小猎犬、诺福克梗、凯恩梗、秋田犬、比格犬）因β1微管蛋白基因突变导致血小板增大（图2D）[16-18]。这些犬可能出现血小板减少（即巨血小板减少症），但因血小板总量正常而无出血异常[19]。
血小板大小变化需结合临床背景解读。
血小板分布宽度（PDW）反映大小异质性，大血小板比率（P-LCR）表示大血小板比例。对于血小板减少症患者，PDW和P-LCR可能是血小板生成增加的更敏感指标[3,20,21]。
四、凝血障碍
4.1 血小板减少症
通常，血小板减少症源于血小板生成减少、消耗增加或破坏增多。病因也可能是多因素的，常见于感染性疾病。在某些犬种（如灵缇犬、波兰猎犬）及前文提到的巨血小板减少症犬中，血小板计数的参考区间下限较低[16-19,22,23]。若血小板功能正常，当观察到自发性出血时，可能提示病理性血小板减少症（尤其是犬血小板计数低于30 000/µL或猫低于15 000/µL）。
4.2血小板增多症
由于脾脏是血小板的储存库和清除场所，脾切除术后可能导致血小板增多持续数月。反应性血小板增多症可继发于炎症、肿瘤、急性贫血、缺铁性贫血或长春新碱治疗。红细胞碎片、胞质碎片、脂血、细菌和/或冷球蛋白可能干扰计数准确性，导致假性血小板增多症。若排除上述原因且血小板计数持续升高（通常>100万/µL），需考虑肿瘤性病变（如原发性血小板增多症、副肿瘤综合征），但这些情况较罕见[3]。
五、结论
血小板在凝血中起关键作用。自动化血液分析仪可评估血小板总量，但其结果并非绝对可靠。对于出血性疾病患者，应结合人工血涂片复查进行血小板计数。血涂片复查操作简便、成本低，可识别血小板聚集等干扰因素，这些因素常导致自动化检测结果准确性下降。
文章要点小编已经为你总结到这里啦！
转发给同行，然后点击【在看】叭~
参考文献
1.Herring J, McMichael M. Diagnostic approach to small animal bleeding disorders. Top Companion Anim Med. 2012;27(2):73-80. doi:10.1053/j. tcam.2012.07.004
2. Wasserkrug-Naor A. Platelet kinetics and laboratory evaluation of thrombocytopenia. In: Brooks MB, Harr KE, Seelig DM, Wardrop KJ, Weiss DJ, eds. Schalm’s Veterinary Hematology. 7th ed. WileyBlackwell; 2022:675-685. doi:10.1002/9781119500537.ch78
3. Harvey JW. Evaluation of hemostasis: coagulation and platelet disorders. In: Harvey JW, ed. Veterinary Hematology. W.B. Saunders; 2012:191-233. doi:10.1016/B978-1-4377-0173-9.00007-5
4. Wills TB, Wardrop KJ. Pseudothrombocytopenia secondary to the effects of EDTA in a dog. JAAHA. 2008;44(2):95-97. doi:10.5326/0440095
5. Williams TL, Archer J. Effect of prewarming EDTA blood samples to 37°C on platelet count measured by Sysmex XT-2000iV in dogs, cats, and horses. Vet Clin Pathol. 2016;45(3):444-449. doi:10.1111/vcp.12378
6. Mylonakis ME, Leontides L, Farmaki R, Kostoulas P, Koutinas AF, Christopher M. Effect of anticoagulant and storage conditions on platelet size and clumping in healthy dogs. J Vet Diagn Invest. 2008;20(6):774-779. doi:10.1177/104063870802000609
7. Granat F, Geffré A, Braun JP, Trumel C. Comparison of platelet clumping and complete blood count results with Sysmex XT-2000iV in feline blood sampled on EDTA or EDTA plus CTAD (citrate, theophylline, adenosine and dipyridamole). J Feline Med Surg. 2011;13(12):953-958. doi:10.1016/j.jfms.2011.07.014
8. Stokol T, Erb HN. A comparison of platelet parameters in EDTA- and citrate-anticoagulated blood in dogs. Vet Clin Pathol. 2007;36(2):148154. doi:10.1111/j.1939-165X.2007.tb00201.x
9. Vasilatis DM, Walker NJ, Borjesson DL. Amikacin disaggregates platelet clumps in EDTA blood samples from cats and dogs when added postcollection. Vet Clin Pathol. 2023;52(2):228-235. doi:10.1111/ vcp.13203
10. Zitzer NC. The greatness of glass: importance of blood smear evaluation. Vet Clin North Am Small Anim Prac. 2023;53(1):29-52. doi:10.1016/j.cvsm.2022.07.005
11. Solanki DL, Blackburn BC. Spurious leukocytosis and thrombocytopenia: a dual phenomenon caused by clumping of platelets in vitro. JAMA. 1983;250(18):2514-2515. doi:10.1001/ jama.1983.03340180068032
12. Norman EJ, Barron RCJ, Nash AS, Clampitt RBB. Prevalence of low automated platelet counts in cats: comparison with prevalence of thrombocytopenia based on blood smear estimation. Vet Clin Pathol. 2001;30:137-140. doi:10.1111/j.1939-165X.2001.tb00422.x
13. Paltrinieri S, Paciletti V, Zambarbieri J. Analytical variability of estimated platelet counts on canine blood smears. Vet Clin Pathol. 2018;47(2):197-204. doi:10.1111/vcp.12604
14. Séverine T, Cripps PJ, Mackin AJ. Estimation of platelet counts on feline blood smears. Vet Clin Pathol. 1999;28(2):42-45. doi:10.1111/ j.1939-165X.1999.tb01041.x
15. Weingart C, Kohn B. What is your diagnosis? Blood smear from a thrombocytopenic dog. Vet Clin Pathol. 2020;49(2):362-364. doi:10.1111/vcp.12850
16. Gelain ME, Bertazzolo W, Tutino G, Pogliani E, Cian F, Boudreaux MK. A novel point mutation in the β1-tubulin gene in asymptomatic macrothrombocytopenic Norfolk and Cairn Terriers. Vet Clin Pathol. 2014;43(3):317-321. doi:10.1111/vcp.12168
17. Bodié K, Gagne GD, Sramek MK, Desmond DJ, Abel SJ, Fagerland JA. Asymptomatic macrothrombocytopenia in a young pure-bred beagle dog: a case report. Toxicol Pathol. 2011;39(6):980-987. doi:10.1177/0192623311416261
18. Hayakawa S, Spangler EA, Christopherson PW, Boudreaux MK. A novel form of macrothrombocytopenia in Akita dogs. Vet Clin Pathol. 2016;45(1):103-105. doi:10.1111/vcp.12331
19. Tvedten H, Lilliehöök I, Hillström A, Häggström J. Plateletcrit is superior to platelet count for assessing platelet status in Cavalier King Charles Spaniels. Vet Clin Pathol. 2008;37(3):266-271. doi:10.1111/j.1939165X.2008.00054.x
20. Bommer NX, Shaw DJ, Milne EM, Ridyard AE. Platelet distribution width and mean platelet volume in the interpretation of thrombocytopenia in dogs. J Small Anim Pract. 2008;49(10):518-524. doi:10.1111/j.1748-5827.2008.00636.x
21. Souza A, Pereira J, Campos S, et al. Platelet indices in dogs with thrombocytopenia and dogs with normal platelet counts. Austral J Vet Sci. 2016;48(3):277-281. doi:org/10.4067/S0301-732X2016000300005
22. Micuń J, Sobczak-Filipiak M, Winnicka A, et al. Thrombocytopenia as a characteristic trait in the Polish ogar dog. Pol J Vet Sci. 2009;12(4):523-525.
23. Zaldívar-López S, Marín LM, Iazbik MC, Westendorf-Stingle N, Hensley S, Couto CG. Clinical pathology of Greyhounds and other sighthounds. Vet Clin Pathol. 2011;40(4):414-425. doi:10.1111/j.1939165X.2011.00360.x
注：本站信息仅供兽医专业人士参考，可为动物疾病诊断与治疗提供思路，但不构成直接医疗指导。本站转载或引用文章如涉及版权问题，请速与我们联系，对此造成的不便深表歉意！
1点学苑
立即点击图片预约课程吧
点击图片了解课程详情
实操课程介绍
点击图片了解课程详情
《为临床医生提供的实用细胞学诊断方法》
细胞学检查中常见的异常细胞形态
猫之皮肤型淋巴细胞增多症
猫之皮肤型淋巴细胞增多症
本文只是冰山一角！想了解更多专业分析？我们已整理在【宠物医师网】
点击血涂片评估：犬猫血小板分析的标准化操作指南，解锁文献
“今天怎么没看到宠物医师网的科普？”
只需3秒完成星标设置，
就能第一时间收到专业知识和在线提醒啦！
【设置指南】
1️⃣点击”宠物医师网”公众号
2️⃣点击右上角【···】
3️⃣选择【设为星标】点亮小星星
文章来源|Today Sveterinary Practice
翻译编辑|张秋雁
审 核|郭羽丽
