PCR 显微注射 性 乳腺蛋白基因的启动子 抗原一抗体杂交
【解析】试题分析：根据基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取（方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成）→基因表达载体的构建（基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等）→将目的基因导入受体细胞（将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法）→目的基因的检测与鉴定（分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因–DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA–分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质–抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等）。据此分析题图可知，操作①为将目的基因——HSA基因导入受精卵内的过程，方法是显微注射法；操作②是对转基因受精卵培育至早期胚胎并移植到代孕奶牛子宫内。
（1）PCR技术可以在短时间内大量扩增目的基因，所以要在短时间内获得大量HSA基因，可以采用PCR技术。
（2）结合前面的分析可知，图中操作①是将目的基因导入动物细胞，最有效的方法是显微注射法；在过程②进行之前，需对早期胚胎进行性别鉴定，可取胚胎细胞进行DNA分析，其采用的基因探针来自性染色体。
（3）为了使HSA基因只在转基因奶牛乳腺细胞中表达，则构建基因表达载体时需要借助DNA连接酶在HSA基因前接上乳腺蛋白基因的启动子。
（4）检测目的基因是否表达产生相应的蛋白质，可将表达产生的蛋白质看做抗原，用特定的抗体进行检测，若出现抗原-抗体的特异性结合反应，则说明目的基因已经成功表达，反之，则没有表达；所以采用检测技术称为抗原-抗体杂交技术。
