结核病是由结核分枝杆菌所引起的慢性传染病,主要经由呼吸道传播,是我国重大传染病之一。利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素是临床上最常见的一线抗结核药物。
由于不合理用药等原因,我国耐药患者高达28-41%,准确地耐药性检测时指导临床合理用药的前提,也是结核的关键。

赛默飞为结核分枝杆菌的检测提供两种方案:传统的从检测到药敏的全面解决方案以及当下的分子生物学解决方案。
上周我们介绍了传统的从检测到药敏的解决方案,今天我们来了解下分子生物学解决方案。
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分子生物学解决方案基于毛细管电泳测序平台以及Ion PGM半导体测序平台,从结核分枝杆菌鉴定、分型到耐药检测,统统都能搞定。

分枝杆菌鉴定
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MicroSEQ 快速微生物鉴定系统采用了高精度的系统发生学方法,用于微生物鉴定.这种方法主要是通过对分枝杆菌16SrRNA基因 的区域进行测序,并将测序结果与数据库中经过验证的序列进行比较而完成鉴定。

MicroSEQ ®快速微生物鉴定系统的数据库包含最广泛验证的细菌数据库, 细菌序列数据库包含超过2000个条目, 其中包含80种分支杆菌。

应用MicroSeq 快速微生物鉴定系统,您可以在5小时内完成分枝杆菌的鉴定。
结核分枝杆菌基因分型
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目前常用的结核分枝杆菌分型技术包括插入序列6110(IS6110),多位点可变数目串联重复序列分析(MIRU-VNTR)、间隔区寡核苷酸分型(Spoligotyping)等。

MIRU-VNTR技术相较于其他分型技术,优势是 简便,快速,分辨率高,可重复性好。而且可采用多重荧光标记,实现高通量自动化分型。结果数字化,便于不同实验室间相互比较及建立全球数据库。
结核分枝杆菌耐药检测
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利福平对结核病有较好疗效使其很快成为结核病短程化疗的主要药物。因而,当结核菌株对其产生耐药 时则严重影响其疗效。如何实现对结核病耐药情况的快速分析,对结核病的控制有举足轻重的影响。

结核分枝杆菌利福平耐药基因检测试剂盒针对TB基因组DNA的rpoB基因设计PCR引物和相应的测序引物,采用PCR体外扩增法结合PCR直接测序技术,检测人结核分枝杆菌rpoB基因507-533位主要基因突变区。
耐多药结核分支杆菌(MDR-TB)的耐药性检测
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随着联合药物治疗的使用,使高耐药及耐多药结核菌株不断出现和传播,对化疗效果及结核病的流行产生了极大影响,增加了死亡率。
耐多药结核(MDR-TB)指至少耐异烟肼及利福平2种或2种以上主要抗结核药物。利福平、链霉素、异烟肼、乙胺丁醇和吡嗪酰胺是主要的抗结核一线药物,其耐药性的出现对感染患者的治疗带来很大困难。

Ion PGM半导体测序平台,基于AmpliSeq™技术,进行多重耐药位点的检测。

Ion PGM个人化操作基因组测序仪,采用先进的半导体芯片技术, 通过专有的大规模并行半导体感应器,对于DNA复制时产生的离子流,实现直接和实时的检测。Ion PGM具有最简捷的测序原理,最具扩展性和最快速的测序速度。

AmpliSeq™技术是超多重PCR技术,在单管内进行超多重PCR, 以此富集靶标序列。方法:直接设计多重引物,按照设计出来的引物的扩增效率的高低,分成一个、二个引物池, 将引物池的引物直接对样品的基因组DNA进行PCR扩增,得到的超多重扩增产物在Ion PGM平台上进行测序。
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防治结核病
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