做Western Blot时，最让人心烦的莫过于精心配好的凝胶，在凝固后出现缩胶——凝胶与玻璃板分离、表面凹陷甚至开裂。尤其是“现配现跑”的胶也出现这个问题时，更是让人百思不得其解。
今天，我们不只告诉你“怎么办”，更要带你搞懂为什么胶会缩，让你从根源上告别这个烦人问题。
胶的“缩”，本质是凝胶在聚合过程中体积不均匀收缩。
要理解这一点，得先知道聚丙烯酰胺凝胶是怎么“长”出来的：
- 单体：丙烯酰胺（Acr）——像盖房子的砖块
- 交联剂：甲叉双丙烯酰胺（Bis）——像连接砖块的水泥
- 引发系统：过硫酸铵（APS）+ TEMED——像启动施工的“点火器”
这个过程是一个自由基引发的链式聚合反应：
APS 在 TEMED 催化下产生自由基 → 自由基启动丙烯酰胺链接成长链 → Bis 把长链交联成三维网状结构 → 凝胶形成。
关键点来了：如果反应太快、太剧烈，就会在凝胶内部产生很大应力，导致体积收缩，就跟水泥干太快会开裂一个道理。
1. 聚合速度过快（最常见元凶）
- 表现：整块胶均匀收缩，与玻璃板分离
- 原因：APS/TEMED 加多了，或环境温度太高，导致反应剧烈、放热过多、水分蒸发快
- 自查：你配胶时室温是否超过 25℃？是不是为了“快点凝”多加了 TEMED？
2. 玻璃板密封不严
- 表现：胶体底部或边缘有缺口、明显不对称
- 原因：灌胶前玻璃板底部或侧边漏水，胶液不足
- 自查：灌胶前你做“漏水测试”了吗？（加水静置 1-2 分钟看漏不漏）
3. 环境过于干燥
- 表现：胶表面（尤其是上样孔附近）塌陷、起皱
- 原因：聚合过程中水分从胶体边缘蒸发，局部脱水
- 自查：是否在空调出风口或干燥环境下灌胶？
4. 凝胶配方问题
- 表现：高浓度胶（如 15%）更容易缩甚至开裂
- 原因：丙烯酰胺浓度太高，或 Bis 比例不当，胶体脆性大
- 自查：是否准确称量？Bis 是否沉淀或失效？
如果连现配的胶都缩，问题一定出在配胶与灌胶的实时操作上。
🔍 第一步：控温 —— 高温是隐形杀手
问题：室温 > 25℃ 时，聚合反应加速，放热剧烈
解决：
- 提前将丙烯酰胺溶液、缓冲液 4℃ 预冷
- 在 冰水浴上 混合所有凝胶液成分
- 考虑将 APS/TEMED 用量 减少 10-20%
🔍 第二步：检查密封 —— 别让胶液“溜走”
必须做：灌胶前给玻璃板夹做 漏水测试（加水观察 1-2 分钟）
小技巧：确保玻璃板底部对齐，夹子力度均匀
🔍 第三步：精确称量与保存 —— 试剂状态决定成败
APS：10% 溶液现配现用，或分装 -20℃ 保存（1-2 个月内使用）
TEMED：密封冷藏，避免挥发
Acr/Bis：储存液如有沉淀，弃用
🔍 第四步：操作柔和连贯 —— 节奏很重要
加入 APS/TEMED 后，温和而彻底地混匀（避免漩涡引入气泡）
混匀后 立即连续灌胶，不要在烧杯中停留
灌完后立刻用水饱和正丁醇或异丙醇液封（隔绝氧气 + 保水 + 压平）
🔍 第五步：创造稳定聚合环境
避免灌胶后移动或振动操作台
远离空调直吹、热源、阳光直射
让胶在平稳、温湿度适宜的环境中聚合 30-45 分钟（分离胶）
玻璃板要洗干净：残留的旧胶或洗涤剂会影响新胶附着，甚至抑制聚合
AP要新鲜：10% APS溶液最好现配现用，4℃保存不超过两周，变黄或不起泡就是失效了
配方要准：特别是Bis的比例，Acr:Bis常用29:1或37.5:1，比例失调胶易脆
灌胶要稳：灌胶后别乱动操作台，避免振动影响聚合
