截止2022年6月，美国、欧盟、中国、日本、韩国、加拿大、巴西等均发布了适合本区域或本组织的生物分析指导原则。这些原则主体内容虽然基本相似，但具体细节并非完全相同，个别验证参数上也存在一定差异。
本期 #微谱药研院 · 技术共探，我们将对在世界范围影响力深远且有代表意义的FDA、EMA，以及对我国的生物分析领域具有明确指导意义的2020中国药典9012，运用色谱分析方法进行生物分析方法验证的部分进行深度比较和解读。欢迎各位专家进行勘误及指出不足之处！
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2020中国药典
这些数据可被用于支持药品的安全性和有效性，或根据毒动学、药动学和生物等效性试验的结果做出关键性决定（包括非临床和临床）；
生物基质（如全血、血清、血浆、尿）中的药物浓度。
2012EMA
To support safety and efficacy based on PK and TK parameter determinations;
Biological matrices, such as blood, plasma, serum, urine, saliva；
Animal TK studies and all phases of clinical trials including BE.
2018FDA
Human clinical pharmacology, BA and BE requiring PK evaluations;
Non-clinical studies;
Biological matrices, such as blood, plasma, serum, urine, tissue;
Veterinary drug: apply to blood and urine BA, BE and PK studies.
专家解读：
2012 EMA没有说明适用于非临床药代动力学，2018 FDA适用范围更广，还适用于生物标志物浓度检测和兽药、组织样本。
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2020中国药典
应该使用至少6个来源的适宜的空白基质来证明选择性，它们被分别分析并评价干扰；
应该考察药物代谢物经样品预处理生成的分解产物以及可能的同服药物引起干扰的程度。应该考虑通常用于受试者群体试验的同服药物。在适当情况下，也应该评价代谢物在分析过程中回复转化为母体分析物的可能性。
2012EMA
Use of fewer sources is acceptable in case of rare matrices；
Alternatively, back-conversion of a metabolite can be checked by applying incurred sample reanalysis. However, in this case potential back conversion during sample processing cannot be ruled out.
其它部分同2020中国药典
2018FDA
hemolyzed samples, lipemic samples or samples from special populations can be included in the selectivity assessment depending on the intended use.
其它部分同2020中国药典
专家解读：
2012 EMA在稀有基质情况下，可以使用少于6个来源的空白基质进行选择性和特异性考察，2018FDA考察范围更广，还需要考察高脂和溶血样本，以及根据不同的研究目的选择特定的基质进行考察。
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2020中国药典
分为批内准确度和精密度、批间准确度和精密度；
最好使用新鲜配制的样品建立标准曲线，但如果有稳定性数据支持，也可以使用预先配制并储存的校正标样。
2012EMA
同2020中国药典
2018FDA
Accuracy and Precision（ A & P ） should be established with at least three independent A & P runs, four QC levels per run (LLOQ, L, M, H QC), and ≥five replicates per QC level.
The sponsor should use freshly prepared calibrators and QCs in all A & P runs. Use of freshly prepared QCs in all A & P runs is preferred; however, if this is not possible, the sponsor should use freshly prepared QCs in one or more A & P runs.
专家解读：
2018FDA强调校正标样新鲜配制，质控样品也建议新鲜配制（如不行，则至少一份A&P分析批中的质控样品新鲜配制），2020中国药典同2012EMA，如果有稳定性数据支持，也可以使用预先配制并储存的校正标样。
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2020中国药典
定量下限，在不高于定量下限浓度3倍的低浓度质控样品，标准曲线范围中部附近的中浓度质控样品，以及标准曲线范围上限约75%处的高浓度质控样品。
2012EMA
updated in 2014
The LLOQ, within three times the LLOQ (low QC), around 30 – 50% of the calibration curve range (medium QC), and at least 75% of the upper calibration curve range (high QC).
2018FDA
LLOQ, low (L: defined as three times the LLOQ), mid (M: defined as mid-range), and high (H: defined as high-range).
专家解读：
三者基本一致
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2020中国药典
未涉及
2012EMA
未涉及
2018FDA
Extracted samples at L, M and H QC concentrations versus extracts of blanks spiked with the analyte post extraction (at L, M and H)；
Acceptance Criteria: Recovery need not be 100 percent, but the extent of the recovery of an analyte and of the ISs should be consistent and reproducible.
专家解读：
虽然2020中国药典和2012EMA未涉及，但国内生物分析一般都是按照2018FDA指导原则执行。
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2020中国药典
当采用质谱方法时，应该考察基质效应。使用至少 6 批来自不同供体的空白基质，不应使用合并的基质。如果基质难以获得，则使用少于 6 批基质，但应该说明理由。
2012EMA
This determination should be done at a low and at a high level of concentration (maximum of 3 times the LLOQ and close to the ULOQ).
2018FDA
无具体操作标准及接收标准
专家解读：
虽然2018FDA未涉及，但国内生物分析一般都是按照2020中国药典指导原则执行。2020中国药典把考察高脂和溶血样本放在这一章节。
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2020中国药典
涉及stock solution stability及working solution stability；
对于同位素内标，在确定无isotope exchange时，可不考察其稳定性；
从冰箱储存条件到室温或样品处理温度，基质中分析物的冷冻和融化稳定性；
基质中分析物在冰箱储存的长期稳定性；
处理过的样品在室温下或在试验过程储存条件下的稳定性；
处理过的样品在自动进样器温度下的稳定性。
2012EMA
同2020中国药典
2018FDA
仅涉及stock solution stability，未提及working solution stability；
对于同位素内标是否考察其稳定性未做说明；
Stock solutions should not be made from reference materials that are about to expire unless the purity of the analyte in the stock solutions is reestablished.
所有稳定性评价试验均使用新鲜配制的储备液。
专家解读：
虽然2018FDA未涉及工作溶液稳定性，但国内生物分析一般都是按照2020中国药典指导原则执行。
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2020中国药典
毒动学试验，每个物种一次；
所有关键性的生物等效性试验；
首次用于人体的药物试验；
首次用于患者的药物试验；
首次用于肝或肾功能不全患者的药物试验。
2012EMA
同2020中国药典
2018FDA
ISR should be conducted in all studies submitted in an NDA, BLA, or ANDA that provide pivotal data for the approval or labeling of the product, regardless of the matrix. (More stringent, makes sense to ensure not just assay reproducibility, but also operational reproducibility.)
专家解读：
2018FDA要求所有提交到FDA的支持NDA, BLA，or ANDA申报的所有研究的数据必须提交重现性分析数据。
正如前文所述，在过去30年生物分析实践经验积累以及法规发展的背景下，生物分析监管模式也在不断演变。虽各大指导原则略有差异，但主体内容越来越趋近，形成全球可接受并相对明确和一致的生物分析规范势在必行，ICH M10草案的发布也必将加快这一步伐。
生物分析的全球标准化进程也必将对制药行业产生积极的影响：对生物分析实验室来讲，无需频繁升级标准操作规程和调整报告格式即可满足不同区域的申报要求；对于制药公司来讲，促进创新药和仿制药注册数据的全球通用，可避免研发资源的重复浪费，加快审评和上市速度；对于监管部门来讲，已核查实验数据全球范围互认，可提高监管效率，节约监管成本。
生物分析研究团队拥有数十位专业且熟练的研究人员，大部分来自行业先进的制药、研发公司，具有多年的复杂药物分析方法开发经验，尤其在GLP生物分析、大小分子生物分析、生物等效性等方面有着丰富的项目经验。
生物分析实验室面积超1000㎡，包含样本室、文档档案室、样本档案室、前处理室、标准品室、天平室、仪器室、UPS等区域，专注于临床前及临床大小分子药物和生物标志物方法开发与验证、临床前及临床样品分析、样品长期存储等，具备完备的质量体系，拥有有经过系统验证的仪器设备和电子化系统，可提供符合中西方药物申报要求的临床样品生物分析服务。
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在生物医药领域，微谱致力于成为您值得信赖的医药研发伙伴（FEI：3017966219）。我们密切关注全球生物医药行业发展趋势，立足药物及医疗器械实验室服务全产业价值链，依托强大的数据库和多年积累的技术、资源优势，为行业提供契合全生命周期的一体化服务，加速产品市场化进程。
参考资料：
[1] ICH. Harmonized Guideline-Bioanalytical Method Validation (M10 Draft version). 2019.02.
[2] 中国药典. 9012 生物样品定量分析方法验证指导原则. 2020年版.
[3] EMA. Guideline on bioanalytical method validation. 2012.02.
[4] FDA. Bioanalytical Method validation Guidelines. 2018.05.
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