2.1仪器与试剂
SPE 1000全自动固相萃取系统，莱伯泰科
MV5多通道平行浓缩系统，莱伯泰科
LC600 二元高压梯度高效液相色谱，莱伯泰科
EZsepTMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京莱伯帕兹检测科技有限公司 货号：PZ12602）
血液替代品：牛血清，市售
咖啡因标准储备液：100μg/mL
咖啡因标准工作液：取1mL标准储备液放入10mL容量瓶中，用甲醇定容配置成10μg/mL标准工作液
2.3实验部分
取血液样本1mL加入磷酸盐缓冲液1mL平衡，加入50μL标准工作液，混合均匀，加标浓度为500ng/mL，待固相萃取。
EZsepTMHLB固相萃取柱，（60mg/3mL北京莱伯帕兹检测科技有限公司 货号：PZ12702）用5mL甲醇乙酸乙酯（1：1）、5mL水和5mL磷酸盐缓冲液进行活化，取全部样液上样，上样结束后用2mL磷酸盐缓冲液和2mL水淋洗萃取柱，在真空状态下干燥0.5min，最后用5mL 磷酸盐缓冲液近干后，用流动相定容至1mL 。涡旋混匀，0.22μm滤膜过滤，待检测。
色谱柱：Promosil C18，5μm，4.6*150mm
波长：272nm
流速：1mL/min
柱温：40℃
进样量：20μL
流动相：甲醇-水= 24：76
