什么是双通道血球【科研“旭”述】如何看懂流式细胞仪的结果图？-上海聚慕医疗器械有限公司

写在最开始的话

流式细胞术是一种广泛应用于血液病诊断、治疗和科研的技术，本期介绍一下如何看懂流式细胞仪的结果图。

流式细胞仪（Flow cytometer ）是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量，并可以根据预选的参量范围把指定的细胞亚群从中分选出来。

各种血细胞系统都具有其独特的抗原，当形态学检查难以区别时，免疫表型参数对各种血液病的诊断和鉴别诊断有决定性作用。采用各种抗血细胞表面分化抗原(CD)的单克隆抗体，借助于各种荧光染料测定一个细胞的多种参数，正确判断细胞的属性，协助临床确诊。广泛应用于外周血细胞的免疫表型分析、凋亡分析和细胞因子的检测。

流式细胞仪在收集大量细胞的基础上，可以根据细胞荧光强度的差异，从混合细胞群中鉴别出不同亚群，并对每一亚群的比例做出精确定量。

图流式细胞仪分选目标细胞的原理

流式通道主要分为散射光通道和荧光通道。散射光通道有两种，包括前向散射光（Forward Scatter，FSC）通道和侧向散射光（Side Scatter，SSC）通道，而不同型号的流式细胞仪其荧光通道（Fluorescent Channels）的多少差异较大。

借助流体系统，细胞悬液在通过流式细胞仪时，从小喷嘴中流出的细胞悬液在鞘液的流体力学作用下向中心聚拢，形成的细流可使细胞依次通过激光束，且一次仅一个细胞。借助光学系统，当细胞通过激光束时，检测器会检测到细胞或颗粒的散射光，放置在前面的检测器检测FSC，而放置在侧面的多个检测器检测SSC。FSC值代表细胞的大小，细胞体积越大，其FSC值就越大。SSC值代表细胞的颗粒度（与细胞中所含的细胞器、细胞核等的数量成正比）。细胞越不规则，细胞表面的突起越多，细胞内能够引起激光散射的细胞器或者颗粒性物质越多，其SSC值就越大。因此，借助FSC或SSC检测到的散射光，即根据细胞大小和颗粒度差异可区分各个细胞群。

荧光通道表示的不是细胞特有的物理特征，而是其化学特征。如需要检测样品中是否有细胞表达某一分子，可以将该分子的抗体与特定的荧光素偶联，这种荧光素通过荧光通道时会被激发而产生荧光。这样该抗体与被检细胞结合后，就可以被识别到，也就能得到该样品中是否有细胞表达该分子（即区分阳性细胞和阴性细胞），以及有多少比例的细胞表达该分子等信息。

荧光强度散点图，在实际操作中最为常见，图中不带有两种荧光的细胞（即“阴性细胞群”）会被分在Q1，就是两种荧光强度都很低的细胞群；相应地，Q3中的点就代表两种荧光强度都很高的“双阳性”细胞群。剩下的Q2和Q4中的点，代表单荧光标记的“单阳”细胞群。通过观察两种荧光染色的细胞分布，就可以判断双阳/单阳比例，进而圈出需要进一步研究的细胞群体。

荧光强度散点图

流式等高线图借助地理等高线图来表示细胞的密集程度，其中的环线代表的是细胞密度相同的区域。等高线越密集的地方表示此区域细胞密度变化越快，环线的中央区域代表细胞聚集的中心。等高线图有其独特的优点，能直观地体现细胞群的集中点，等密度环线的中央区域代表一个细胞群的集中点，一般代表一个细胞群。在某些情况下，等高线图比散点图更能直观地体现细胞的分群（红框）。