定标方法分为线性和非线性，又分为单点和多点定标方式，单点定标用在线性定标当中，目前不推荐使用。其原理是利用去离子水作为校准品进行一次校准也就是一点，然后输入K因数，这样就会在坐标上形成一条以因数为斜率，以水点吸光度为起点的直线。由于因数都是试剂厂家给的参考因数，而操作者很少去自行验证修改，所以此法做出来的结果往往线性不好。
2点线性法：
通过测定空白或第一标准品与标准品或第二标准品形成工作曲线。第一标准品一般选择水点。
多点线性法：通过测定空白或第一标准品与标准品或第二标准品到第六标准品，形成线性回归工作曲线。
对数Logit法(非线性)：用于随浓度升高而吸光度收敛的工作曲线。定标点3－ 6个，第一点般为水点，其余为校准品。
指数函数法(非线性)：用于随浓度升高而吸光度出现离散的工作曲线定标点3 -6个第一点一般为水点，其余为校准品。
样条函数法(非线性法)： 将每一标准值点对点连接起来，形成一个曲线，将测定误差也拟合到曲线中，此法优于折线法。定标点3‐6个，第一点一般为水点，其余为校准品。
折线法(非线性法)：将每一标准值点对点连接起来，形成一个折线，定标点3- 6个，第一点一般为水点，其余为校准品。
同功酶线性法：一种样本有两种不同的同功酶，如果含有抑制剂的试剂不能完全单独抑制一种同功酶，此时测定总活性和剩余活性可以计算出同功酶的活
性。使用两个通道分别计算总酶活性和同功酶活性曲线。如果另种同功酶中指定一种同功酶的活性可以被单克隆抗体完全抑制的话，就没有必要选择这种方式。
定标原理：使用两个通道，数字较小的通道(同功酶P)，先用一种试剂测定总的活性CF。在另一个通道，用含有抑制同功酶M或同功酶N的抑制剂的试剂测定同功酶M的活性CM或者同功酶N的活性CN。一般来说，此时同功酶N的抑制剂不能完全抑制同功酶N的活性，却一定程度上抑制了同功酶M的活性。在此同功酶法中，两个通道分别测定总活性及同功酶M、N的标准品活性。通常将总活性通道测得的K系数用于两个通道。M和N的剩余活性通过两个通道的第3、4标准品吸光度比率得到。利用这些数据计算出酶的总活性和同功酶M的活性，同功酶N的活性则通过项目间的计算获得。
定标的修正：
量程定标：只使用试剂空白液以外的标准液1点进行定标目的修正以前工作曲线的斜率。
两点定标：使用试剂空白液和标准液1点进行定标目的修正前次工作曲线的S1ABS和斜率。
全点定标：对指定的所有标准液全部使用的方，在定后所有参数被更新。
校准时的检查：定标结果的正确与否直接影响测试结果的准确，因此，有很多方法来验证每一校准品的准确性，并提供报警信息给操作者提示。根据厂家的不同，方法和称谓有所不同，大致的检查方法如下：
第一标准液允许吸光度的检查；
偏差允许偏差吸光度的检查；
灵敏度检查；
K系数检查；
无法做出工作曲线的检查；
允许收敛吸光度检查；
反应界限吸光度检查；
反应线性检查；
前带检查分为抗原再添加法和反应速度检查；
定标也就是校准，是确保仪器精度的一种手段，在定标之前一定要确保重复性，良好的重复性才是定标的前提。标准品是定值的，根据赋予的靶值来修正仪器的测量值，使其达到准确。
