中文摘要
目的评估人凝血因子Ⅸ（human coagulation factor Ⅸ，FⅨ）在血友病B患者中单次静脉注射的药代动力学参数，并初步分析其临床意义。
方法在1项单臂、开放标签、多中心临床试验研究中，13例25～64岁男性血友病B患者在非出血状态下接受FⅨ 50 国际单位（international unit，IU）/kg单次静脉注射，给药前2 h及给药后15、30 min和1、3、9、24、48、72、96 h采血检测FⅨ活性，采用非房室模型计算FⅨ的药代动力学参数。给药后30、90 d检测患者的FⅨ抑制物。
结果FⅨ单次静脉注射15 min～1 h后，所有患者血浆FⅨ浓度达到峰值（51.5～69.3 IU/dL）。根据FⅨ基线水平校正的药代动力学参数（均值±标准差）为：达峰时间（0.37±0.22） h，消除半衰期（29.732±4.576） h，峰浓度（58.3±5.3） IU/dL，清除率（0.028±0.006） dL/kgh，血药浓度-时间曲线下面积（零时至最后时间点）（1 626.189±285.365） %h，增量回收率（1.166±0.106） IUdL-1/IUkg-1。给药后1 h，所有13例患者的FⅨ活性在40%～60%；给药后3 h，有12例患者FⅨ活性维持在40%～60%；给药后9 h，仍有8例患者FⅨ活性处于40%～60%。13例患者均未检测到FⅨ抑制物。
结论血友病B患者在单次静脉注射FⅨ 50 IU/kg后，主要药代动力学参数，如消除半衰期及清除率等的结果表明其能在体内维持有效的血药浓度，此结果可用于进一步临床研究以评估替代治疗的疗效。
正文
血友病B为X染色体遗传疾病，全球男性患病率为3.8/10万。血友病B患者的人凝血因子Ⅸ（human coagulation factor Ⅸ，FⅨ）基因突变导致血浆FⅨ含量或活性降低，表现为内源性凝血障碍，自发性出血或创伤后难以控制出血。FⅨ制剂是血友病B首选替代治疗药物。
药代动力学（pharmacokinetics，PK）是FⅨ制剂临床开发的重要研究内容。由于PK参数结果差异大，如消除半衰期（elimination half-life，t1/2）和增量回收率差异可达2～4倍。因此，通过对患者PK参数的监测来进行FⅨ给药剂量的优化至关重要，可提高疗效并有效控制出血。血友病B患者常见的关节出血治疗推荐预期FⅨ水平为正常人的40%～60%，大手术之前预期FⅨ水平为60%～80%，经验性或固定给药剂量可能达不到预期而增加出血风险，监测血浆FⅨ浓度可降低治疗过程的出血风险。FⅨ代谢存在个体差异，PK监测及模拟分析可更准确地反映其代谢特征，从而确定个体化FⅨ剂量，这是替代治疗的主要原则。在群体PK分析中，与固定剂量方案相比，个体化给药在准确预测及实现末次给药后96 h目标FⅨ水平方面更具优势。
本研究拟评估成人血友病B患者单次静脉注射FⅨ后的PK参数，观察FⅨ在体内代谢特征，初步分析其临床意义，为按需治疗等个体化治疗策略提供参考。
1
材料与方法
1.1
药物、试剂与仪器
FⅨ制剂（批号：202309M05）由广东双林生物制药有限公司生产。
活化部分凝血活酶时间测定试剂盒（凝固法）（批号：557676）、缓冲液（批号：569933）、正常范围定值质控血浆（批号：507926/507934）、病理范围定值质控血浆（批号：556742）、乏FⅨ血浆（批号：504168/504172B）、校准品（批号：563116）、氯化钙溶液（批号：563914）等均购自德国西门子医学诊断产品有限公司。
Sysmex CS-5100全自动凝血分析仪购自德国西门子医学诊断产品有限公司。
1.2
研究对象
本研究为单臂、开放标签、多中心临床试验，试验设计参照2019年国内颁布的《重组人凝血因子Ⅸ临床试验技术指导原则》，在年龄≥12岁的血友病B患者中开展FⅨ单次静脉注射的PK研究，分析给药后患者体内FⅨ活性，研究样本均由主要研究中心——济南市中心医院的临床研究中心实验室集中进行批次化检测。
本研究已通过委托的临床研究中心/医院伦理委员会评审（伦理号：2023-198-03、YW202400302），所有患者签署知情同意书。
1.2.1 入选标准年龄12～70岁；临床确诊为血友病B且筛选期或既往有检测结果证实的FⅨ活性≤2%，伴有或不伴有出血的临床表现（包括关节疼痛、肿胀等）；经治疗的患者，给药暴露日≥100 d；所有生育年龄的患者必须在首次签署知情同意书后直至研究完成后3个月内采取有效的避孕措施；成年患者自愿签署知情同意书，未成年患者经其法定监护人同意并自愿签署知情同意书。
1.2.2 排除标准有FⅨ抑制物阳性家族史或既往确诊FⅨ抑制物阳性或筛选期检测呈阳性，检测值≥实验室正常值上限，即Bethesda法检测FⅨ≥0.6 Bethesda单位/mL；对FⅨ及其制剂所含成分过敏且不能耐受治疗的患者；其他先天性或获得性出血性疾病、严重的心血管疾病，以及6个月内有脑卒中或严重的深静脉血栓、肺栓塞、动脉栓塞或弥散性血管内凝血的患者；入组前3个月内以及计划在研究期间进行大手术的患者；入组前3个月内及计划在研究期间输注全血、血浆、红细胞、血小板、冷沉淀的患者；入组前14 d内使用过任何抗凝药物或抗血小板药物治疗或研究期间需要抗凝治疗和抗血小板治疗的患者；入组前7 d内使用过含FⅨ制剂（如重组/血源FⅨ或凝血酶原复合物）的患者；入组前96 h内，使用过抗纤维蛋白溶解药物（如6-氨基己酸）或其他影响FⅨ活性及代谢的药物（如聚乙二醇重组尿酸酶、艾加莫德）的患者；入组前经研究者判断出血症状严重（如中枢神经系统出血、喉和颈部出血、消化道大出血、危及生命的内脏出血）的患者；实验室检测提示肝肾功能不全，以及血小板计数＜100×109 L-1、血红蛋白＜60 g/L且需要输血的患者；乙型肝炎病毒表面抗原、丙型肝炎抗体、HIV抗体及梅毒血清学检测阳性的患者。
1.3
PK分析
在非出血状态下，患者单次静脉注射人血浆来源的FⅨ 50 国际单位（international unit，IU）/kg（1 IU FⅨ=1 mL正常人血浆中FⅨ的量），采血时间为给药前2 h，给药后15 min、30 min、（1 h±2 min）、3 h、（9 h±10 min）、24 h、48 h、72 h、（96 h±20 min）。室温下，以1 500×g离心15 min，分离血浆，检测管（血浆样本体积≥0.8 mL）和备份管各1支分装血浆，在2 h内将其置于-90～-60 ℃保存；检测时分批取出血浆，置于水浴锅37 ℃复融5 min后按1.4方法检测FⅨ活性。采用Phoenix WinNonlin 8.1.0软件进行非房室模型计算主要PK参数：终端消除速率常数（terminal elimination rate constant， λz）、t1/2、达峰时间（peak time，tmax）、峰浓度（peak concentration，Cmax） 、血药浓度-时间曲线下面积（area under the plasma drug concentration time curve，AUC）（0-t：零时至最后时间点；0-inf：零时至无穷）、表观分布容积（apparent volume of distribution，Vd）、清除率（clearance，CL）。用SAS 9.4软件进行数据统计分析。数据以均值±标准差表示。
1.4
FⅨ活性和抑制物检测
对1.3中采集的血浆，用Sysmex CS-5100全自动凝血分析仪，按相关标准采用一期法定量检测人血浆中FⅨ活性，如果首次检测活性值低于定量下限（1.4 IU/dL），则对血浆样本进行2倍浓缩操作复检，并以此结果进行计算。分别在给药后30、90 d，采用Bethesda法检测FⅨ抑制物。上述检测依据中国药典2020年版四部通则9012“生物样品定量分析方法验证指导原则”进行验证。
2
结果
2.1
一般资料
2024年1月19日—5月29日，累计13例平均年龄36岁（25～64岁）的血友病B患者入组，患者体重（73±9） kg，均为中间型血友病B患者，基线FⅨ活性1.1%～3.1%。3例患者的家族史中未发现其他血友病B患者，所有患者基线筛查FⅨ抑制物检测结果均为阴性。
2.2
血友病B患者FⅨ的PK参数
FⅨ 50 IU/kg单次静脉注射后未校正的PK参数见表1。为排除基线时可能合并的其他凝血功能缺陷或抑制物等对检测结果的影响，根据基线FⅨ水平校正的PK参数见表2。总体上，根据基线FⅨ水平校正的PK参数与未校正的结果趋于一致，提示患者诊断结果准确、无其他凝血疾病及抑制物等因素影响。FⅨ 50 IU/kg单次静脉注射后15 min～1 h，所有患者的血浆FⅨ浓度达到峰值，为51.5～69.3 IU/dL。其中，9例患者在给药后15 min血浆FⅨ浓度达到峰值，3例患者在0.5 h达到峰值，1例患者基线FⅨ水平为1.5%，在给药后1 h达到峰值。该结果表明药物吸收迅速，可短时间内提高体内FⅨ水平，从而有效控制出血。
未根据FⅨ基线校正的主要PK参数如下：t1/2为（36.591±8.014） h，tmax为（0.37±0.25） h，Cmax为（60.2±5.5） IU/dL，CL为（0.024±0.005） dL/kgh，AUC0-t为（1 813.020±297.879） %h。根据FⅨ基线水平校正的相应参数：t1/2为（29.732±4.576）h，tmax为（0.37±0.22）h，Cmax为（58.3±5.3）IU/dL，CL为（0.028±0.006） dL/kgh；AUC0-t为（1 626.189±285.365） %h。增量回收率在1.006～1.324 IUdL-1/IUkg-1范围内。
2.3
血友病B患者的FⅨ活性
在所有患者单次静脉注射FⅨ 50 IU/kg后持续监测FⅨ活性，以预测控制出血效果，结果见表3。给药后1 h所有13例患者FⅨ活性在40%～60%；12例患者给药后3 h FⅨ活性维持在40%～60%；8例患者给药后9 h FⅨ活性仍处于40%～60%，符合世界血友病联盟推荐的FⅨ替代治疗方案建议的预期患者体内达到的FⅨ水平。
检测免疫原性可识别潜在的治疗效果不佳、过敏、细胞因子释放综合征等风险。给药后30、90 d的结果显示，所有患者均未检测到FⅨ抑制物，提示药物免疫原性风险较低，可进行按需治疗等进一步疗效评估。
3
FⅨ为血友病B患者的主要替代治疗药物，目前国内血友病B患者FⅨ给药水平偏低，达不到规律的预防给药、控制出血的效果。分析FⅨ制剂的主要PK参数可为个体化给药、达到FⅨ目标水平、有效控制出血提供指导。FⅨ体内代谢差异大，可能与其血管外分布、与未知分子或血管内皮结合等有关，个体间代谢差异可导致FⅨ增量回收率差异显著。为避免室性模型繁杂的反复计算可能出现的错误，研究者通常采用更直接、可靠的非房室模型分析FⅨ的PK数据。在血友病B的治疗中，给药后的药效学指标，如FⅨ浓度和体内FⅨ活性增加值以及t1/2、Vd、CL等主要PK参数是疗效评估的重要支持与量化数据。对药效学指标和PK参数的研究，符合FDA等审评机构的指导原则，可为优化血友病B的治疗策略、FⅨ治疗的个体化给药提供依据，从而实现最大获益。血友病B患者的FⅨ替代治疗中给药剂量通常参照体内FⅨ活性，输注1 IU/kg的血浆来源FⅨ可提高体内FⅨ活性约1%（即1 IU/dL）。
世界血友病联盟推荐对凝血因子药品进行PK监测，治疗血友病B的FⅨ制剂的PK研究通常需包含至少8个采血时间点，且在给药后72 h内完成。本PK研究延长至给药后96 h，共观察了10个血样采集时间点的PK参数及FⅨ活性值。本研究的13例中间型血友病B患者的基线FⅨ水平较低，为1.1%～3.1%，单次静脉注射50 IU/kg后15 min FⅨ活性显著升高；所有患者FⅨ活性提高幅度＞50%，提示研究药物可快速提高体内FⅨ水平，从而及时、有效地控制出血。本研究PK数据显示，t1/2为（29.732±4.576） h，符合国内治疗指南建议的每天1次给药以维持体内需要的FⅨ水平。Cmax是用于计算增量回收率的主要PK参数，世界血友病联盟推荐给药后15～30 min检测Cmax以验证给药剂量，本研究根据基线FⅨ水平校正的Cmax为（58.3±5.3） IU/dL。增量回收率为药效学、给药剂量及频率等参照以控制出血的重要指标，本研究的增量回收率在1.006～1.324 IUdL-1/IUkg-1范围内，为（1.166±0.106） IUdL-1/IUkg-1。美国CSL Behring公司的FⅨ产品MONONINE® 25 IU/kg单次静脉给药增量回收率为（0.67±0.14） IUdL-1/IUkg-1；加拿大武田制药公司的FⅨ产品在重度血友病B患者中50～70 IU/kg单次静脉注射后增量回收率为0.92 IUdL-1/IUkg-1，本研究FⅨ产品的增量回收率略高于国外同类产品。患者的个体差异、检测方法、产品的提纯工艺等多重因素可能影响上述FⅨ产品之间的比较。
本研究评估的FⅨ产品在50 IU/kg单次静脉注射后1 h，所有患者（13例）FⅨ活性在40%～60%；给药后3 h，12例患者FⅨ活性在40%～60%；给药后9 h，仍有8例患者的FⅨ活性维持在40%～60%，达到了预期的FⅨ水平。
此研究的局限性在于仅观察了13例血友病B患者；虽采集PK数据至给药后96 h，但t1/2的准确评估需要给药后1～2周的持续观察；另外，目前群体PK报告缺乏足够的样本量及相对同质的数据，未结合相应模型进行CL等主要PK参数的比较分析。
本研究结果表明，给予血友病B患者50 IU/kg FⅨ单次静脉注射后体内FⅨ活性显著增高，为后续进一步开展按需治疗等研究的疗效及安全性评估提供了依据，也为血友病B患者FⅨ替代治疗的给药剂量优化和个体化策略提供了支持。
作者
杨波波 荆强 陈相 秦亮 郑炎
广东双林生物制药有限公司研发中心，湛江 524076
通信作者：郑炎，
Email：zhengyan@slbiop.com
引用本文：杨波波, 荆强, 陈相, 等.人凝血因子Ⅸ在血友病B患者中的药代动力学研究[J]. 国际生物制品学杂志, 2025, 48(5): 309-314.
DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20250119-00008
