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(一)单项选择题(A型题)
1.HRP的活性基团是B
A.糖蛋白 B.亚铁血红素 C.白蛋白D.球蛋白 E.色氨酸
2.HRP的纯度用RZ表示,它是以何比值表示D
A.λ420nm/λ275nm B.λ403nm/λ290nm C.λ275nm/λ403nm
D.λ403nm/λ275nm E.λ290nm/λ275nm
3.HRP(用于标记)的RZ值应大于A
A.3.0 B.3.1 C.3.2 D.3.3 E.3.4
4.β-Gal的常用底物是E
A.OPD B.TMB C.ASA D.ABTS E.4MUG
5.下列酶-底物-颜色反应组合中，正确的是C
A.HRP-OPD-蓝色 B.HRP-TMB-红色 C.AP-P-NPP-黄色
D.HRP-P-NP蓝色 E.AP-TMB-蓝色
6.EMIT测定可以测定B
A.大分子抗B.小分子抗原或半抗原 C.补体
D.PCAb E.MCAb
7.应用较广泛的均相EIA是C
A.(：EDIA B.SPEIA C.EMrI、
D.ELISA E.IFA
8.关于酶免疫技术的特点，正确的是C
A.酶标记物催化抗原抗体反应，使其结果放大，提高了检测的灵敏度
B.酶活性易受理化因素的影响，酶标记物稳定性差
C.底物经酶催化后的成色，使酶标记免疫反应结果得以放大
D.选择高质量的标记用酶是建立酶免疫技术较重要的前提
E.酶免疫技术检测方法较为繁琐
9.关于固相化抗体的制备，正确的是B
A.抗体包被固相载体后，再用小牛血清白蛋白包被一次为了稳固载体对抗体的
吸附
B.化学偶联法包被抗体，可有效提高包被抗体的结合量、均一l生和牢固程度
C.为提高抗体的包被量，包被液的浓度应较高
D.吸附法包被抗体时，选用偏酸性的缓冲液，可提高包被抗体的稳定性
E.包被抗体时，温度越高越有利于提高包被抗体的稳定性
10.关于载体的选择，正确的是B
A.醋酸纤维膜吸附蛋白的能力强于塑料板，但对微量样品的吸附不完全
B.子微颗粒载体含有的基团易与抗体蛋白形成化学偶联，且结合容量大
C.塑料制品吸附蛋白分子的稳定性和均～性好
D.固相微颗粒因体积小，不易与磁性材料组合使用
E.膜载体吸附抗体蛋白一般是采用化学偶联法
11.酶免疫技术用于样品中抗原或抗体的定量测定是基于C
A.酶标记物参与免疫反应
B.固相化技术的应用，使结合和游离的酶标记物能有效地分离
C.含酶标记物的免疫复合物中酶可催化底物成色，其颜色的深浅与待测物含量
相关
D.酶催化免疫反应，复合物中酶的活性与样品测定值呈正比
E.酶催化免疫反应，复合物中酶的活性与样品测定值呈反比
12.关于HRP，描述正确的是D
A.HRP由具酶活性的蛋白主酶和亚铁血红素辅基构成
B.测定HRP的RZ值，可判断酶活性的高低
C.HRP对酶催化反应中的受氢体专一性要求不高
D.酶变性后，其.RZ值不变
E.邻苯二氨底物液被HRP催化显蓝色，其较大吸收波长为492nm
13.均相酶免疫测定的基本特征是A
A.反应平衡后，抗原抗体复合物中酶活性会发生变化
B.酶标抗原与抗体在固相介质表面形成复合物后，作用于底物成色
C.不用分离B、F即可确定待测物质的含量，表明其反应不易受内源性酶的
干扰
D.反应属于非竞争结合，测定的灵敏度较高
E.测定方法较为复杂，且不易用于自动化检测
14.属于均相酶免疫测定的方法是D
A.酶联免疫化学发光测定 B.dot-ELISA C.双抗体夹心法ELISA
D.酶增强免疫测定技术 E.竞争法ELISA
15.反应结束时，阴性对照管的呈色较强，此情况常见于B
A.双抗体夹心法ELISA B.竞争法ELISA C.间接法ELISA
D.捕获法ELISA E.双抗原夹心法ELJSA
16.免疫渗滤试验衍生于B
A.RIA B.dot-ELISA C.免疫层析试验
D.免疫印迹试验 E.免疫扩散试验
17.双位点ELISA中，造成抗原测定值低于实际含量的常见原因是D
A.固相抗体过多 B.反应时间不够 C.标记抗体过多
D.待测物过浓 E.洗涤不彻底
18.间接法ELISA中，形成的免疫复合物是A
A.固相抗原-抗体-酶标二抗 B.固相抗体-抗原-酶标抗体
C.固相二抗-IgM-抗原-酶标抗体D.固相抗体-酶标抗原
E.固相抗原-抗体-酶标抗原
19.下述酶免疫组织化学技术中，敏感性较高的方法是E
A.直接染色法 B.间接染色法 C.酶桥法
D.过氧化物酶-抗过氧化物酶法
E.亲和素-生物素-过氧化物酶技术
20.酶桥染色法中的桥抗体是指C
A.免疫反应系统中的特异性抗体 B.显色系统中的抗酶抗体
C.第二抗体(抗抗体) D.第一抗体
E.第三抗体(抗酶抗体)
21.酶免疫组织化学技术中，常用的酶是B
A.胰蛋白酶，葡萄糖氧化酶 B.辣根过氧化物酶，碱性磷酸酶
C.胃蛋白酶，蛋白酶K D.碱性磷酸酶，胃蛋白酶
E.葡萄糖氧化酶，蛋白酶K
22.HRP催化的反应式为DH2+H2O2→D+2H2O2,何者习惯上被称为底物A
A.DH2 B.H2O2 C.D D.H2O E.AP
23.OPD 经与HRP反应后,再用H2SO4 终止反应后呈E
A.橙黄色B.黄色C.蓝色D.红色E.棕黄色
24.下列哪种方法用一种标记物可检测多种被测物C
A.ELISA双抗体夹心法B.ELISA竞争法
C.ELISA间接法D.ELISA捕获法
E.放射免疫测定法
25.目前ELISA中应用较广泛的底物是B
A.OPD B.TMB C.5-ASA D.ABTSE.P-NPP
26.ELISA间接法是用于B
A.酶标记抗原用于抗体的检测B.酶标记抗抗体用于抗体的检测
C.酶标记抗抗体用于抗原的检测D.酶标记抗体用于抗原的检测
E.酶标记抗原用于抗原的检测
27.捕获法主要用于何种物质的测定A
A.IgM B.IgG C.IgA D.IgD E.IgE
28.ELISA双抗体夹心法是A
A.酶标记特异抗体用于抗原的检测 B.先将待测抗原包被于固相载体
C.标记一种抗体可检测多种抗原D.能用于半抗原的测定
E.属竞争结合测定
二、填空题
l.膜载体酶免疫测定技术的类型主要有( 斑点-ELISA免疫渗滤试验 )、( 免疫层析试验 )、( 免疫印迹法 )
2.免疫印迹法是由( SDS-PAGE蛋白质转印 )，( 酶免疫测定 )和( )三项技术结合而成。
3.酶免疫组织化学技术常用的酶有( HRP )、( AP )和( GOD )。
4.EIJSA方法类型主要有( 双抗体夹心法 )、( 间接法 )、( 竞争法 )和( 捕获法 )。
5.ELISA中三种必要试剂是( 固相的抗原或抗体 )、( 酶标记的抗原或抗体 )和( 酶的反应底物 )。
6.制备酶结合物常用的方法有( 戊二醛交联法 )和( 过碘酸盐氧化法 )。
7.在稀释液和洗涤液中加入( 吐温一20 )，可以去除非特异性吸附。
8.均相酶免疫测定技术的类型主要有( 酶增强免疫测定技术 )和( 克隆酶供体免疫分析技术 )。
9.非标记抗体酶免疫组织化学技术的类型主要有( 酶桥法)、( PAP法 )、( 双桥PAP法 ) 和( APAAP法 )。
10. ( SDS-PAGE,), ( 蛋白质转运 )和( 酶免疫测定 )三项技术结合而成形成免疫印迹法。
11.常用于HRP标记抗( 戊二醛交联法 )和( 过碘酸钠法 )。
三、名词解释
1.酶免疫技术：是指利用酶的快乐催化和放大作用与特异性免疫反应结合而建立的一种标记免疫技术。
2.封闭：是指在抗原或抗体包被ELISA板后，用1%～5%牛血清白蛋白或5%～20%小牛血清等再包被，以防止非特异性吸附。
3.异相EIA：是指在酶免疫测定中，抗原抗体反应后，需分离游离的和与抗原(或抗体)结合形成复合物的酶标记物，然后对经酶催化的底物显色程度进行测定，再推算出样品中待测抗原(或抗体)的含量。
4.包被：是指将抗原或抗体固相化的过程。
5.均相酶免疫测定：是指抗原抗体反应平衡后，无需分离F和B，直接根据反应前后酶活性的改变进行待检物质的测定。
四、问答题
1.用于标记的酶应符合哪些要求?
DA(1)酶活性高，能对低浓度底物产生较高的催化反应率。(2)具有可与抗原、抗体共价结合的基团，标记后酶活性保持稳定，而且不影响标记抗原与抗体的免疫反应性。(3)酶催化底物后产生的信号产物易于判定或测量，且方法简单、敏感和重复性好。(4)酶活性不受样品中其他成分(内源性酶、抑制物)的影响;用于均相酶免疫测定的酶还要求当抗体与酶标抗原结合后，酶活性可出现抑制或激活。(5)酶、辅助因子及其底物均对人体无危害，理化性质稳定，且价廉易得。
2.简述酶免疫技术的分类。
DA(1)酶免疫技术按实际用途，分为酶免疫组化和酶免疫测定两大类。(2)按抗原抗体反应后是否需将结合的和游离的酶标记物分离，分为均相酶免疫测定和异相酶免疫测定，异相酶免疫测定又可分为固相酶免疫测定和液相酶免疫测定。
3.简述均相酶免疫测定的原理。
DA酶标抗原(AgE)与Ab结合形成AbAgE后，其中的酶(E)活性将减弱或增强。因此，不需对反应液中的AbAgE和AgE进行分离，直接测定反应系统中总酶活性的变化，即可推算出被测样品中Ag的含量。
4. 简述双抗体夹心法的原理。
DA连接于固相载体上的抗体和酶标抗体，与待检抗原上两个不同的抗原决定基结合，形成固相抗体一抗原一酶标抗体复合物。由于反应系统中固相抗体和酶标抗体的量相对于待检抗原是过量的，因此复合物的形成量与待检抗原的含量成正比。测定复合物中酶作用于加入的底物后生成的有色物质量，即可确定待检抗原含量。
5.斑点-ELISA有哪些优点?
DA(1)NC膜吸附蛋白力强，微量抗原吸附完全，故检出灵敏度可较普通的EusA高6～8倍;(2)试剂用量较EusA省10倍;(3)操作简便，试验及结果判断不需特殊设备条件;(4)吸附抗原(抗体)或已有结果的NC膜可长期保存(-20℃可达半年)。
6.简述ELISA的基本原理、方法类型及应用。
DA(1)基本原理：抗原或抗体预先结合到某种固相载体表面;测定时，将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物;反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待检抗体或抗原的量成一定比例;经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，较后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。(2)方法类型及应用：①双抗体夹心法：用于检测抗原，适用于检测两个或两个以上抗原决定基的多价抗原;②间接法：用于检测抗体;③竞争法：用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定;④捕获法：用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。
7.简述酶增强免疫测定技术的原理。
DA具抗原及酶活性的Ag-E与Ab结合形成AgAb后，所标的酶(E)因与Ab接触紧密，空间位阻影响了酶的活性中心，酶活性受到抑制。加入未标记抗原(标准或样品中的Ag)后，Ag即与Ab叫竞争结合反应系统中限量的Ab形成AgAb复合物，从而使反应液中AgAb*(酶活性被抑制)的比例减少，具酶活性的游离AgE增多。较终测得的酶活性随着反应体系中未标记抗原(Ag)浓度升高而增强。
8.简述克隆酶供体免疫分析技术的原理。
DNA重组技术可分别合成某种功能性酶分子的两个片段，大片段为酶受体(EA)，小片段为酶供体(ED)。单独的EA和ED均无酶活性，但在一定条件下可结合形成具酶活性的四聚体。CEDIA即是用ED标记抗原(Ag-ED)，反应系统中再加入相应的EA、Ab及样品抗原(未标记)，反应时由于抗原抗体间的亲和力大于ED与EA者，因此Ag-ED和Ag易与Ab结合形成复合物。而AbAg-ED中的Ag-ED。由于空间位阻的干扰不能与EA结合，游离的Ag-ED则可与EA结合成具活性的全酶。由于反应属竞争结合，故反应液中游离的AgIE。随着未标记Ag量的增多而增加，使较终加入底物后测得的酶活性与样品Ag含量成正比。
9.简述免疫印迹法的原理。
DA免疫印迹法亦称Western blot，由SDS-PAGE、蛋白质转印和酶免疫测定三项技术结合而成。抗原等蛋白样品经SDS处理后带负电荷，SDS-PAGE时从阴极向阳极泳动，分子量小者，泳动速度快;将凝胶中已经分离的蛋白质条带在电场作用下转移至硝酸纤维素膜上;将印有蛋白质条带的硝酸纤维素膜依次与特异性抗体和酶标第二抗体作用，加入能形成不溶性显色物的酶反应底物，使区带染色;根据电泳时加入的分子量标准，可确定各组分的分子量。
六、论述题
1.试论述ELISA的基本原理、方法类型及各种方法的应用价值。
答：ELISA 基本原理是：把抗原或抗体在不损坏其免疫活性的条件下预先结合到某种固相载体表面;测定时，将受检样品(含待测抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按一定程序与结合在固相载体上的抗原或抗体起反应形成抗原或抗体复合物;反应终止时，固相载体上酶标抗原或抗体被结合量(免疫复合物)即与标本中待抗体或抗原的量成一定比例;经洗涤去除反应液中其他物质，加入底物进行显色，较后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。方法类型及应用：双抗体夹心法，是检测抗原较常用的方法，适用于检测两个以上抗原决定簇的多价抗原。间接法，是测定抗体较常用的方法。竞争法，可用于抗原和半抗原的定量测定，也可对抗体进行测定。捕获法，主要用于血清中某种抗体亚型成分(如IgM)的测定。
